一株粘质沙雷氏菌的筛选及其所产红色素抗癌功能初步研究

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灵菌红素(Prodigiosin)是由粘质沙雷氏菌产生的一类红色次级代谢产物,其分子中含有三个共轭的毗咯环。随着对灵菌红素研究的深入,人们发现灵菌红素具有抗癌、抗菌、抗疟疾、免疫抑制和抑藻的功效。灵菌红素的抗癌性优势主要体现在对癌细胞的较强天的针对性上,作为一种新型抗癌药物的前体物质,粘质沙雷氏菌和灵菌红素的研究引起了国内外学者广泛的关注。本文主要完成鳜鱼肠道中一株粘质沙雷氏菌株的筛选和鉴定,并将其命名为S.marcescens HFUT 1301。色素的分离、纯化和结构鉴定;培养基组分和发酵条件的优化,以提高色素的产量;通过MTT法测定灵菌红素对肺癌细胞A-549、乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制性,考察灵菌红素对两种常见的癌细胞的抑制作用。主要研究内容和结果如下:(1)通过单菌落观察、菌株的生理生化鉴定和16S rDNA序列分析,与NCBI数据库比对和鉴定,确定试验所得菌株为一株新型粘质沙雷氏菌,并将其命名为S.marcescens HFUT 1301。(2)色素的结构分析:通过UV-Vis全波长扫描、LC-MS、FT-IR和NMR图谱的对色素进行结构分析和鉴定,确定该色素为灵菌红素色素,分子式为C2oH25N30(对应的分子量为323),并推测了红色素的结构式。(3)为了进一步提高S.marcescens HFUT 1301发酵产灵菌红素的产量,对培养基组分和发酵条件进行优化,结果表明:当一级大豆油、蛋白胨、NaCl和K2HPO4的添加量分别为4%(v/w)、1.5%(w/w)、0.15%(w/w)和0.15%(w/w);发酵条件为:温度为30℃、接种量为1%(v/v)、装液量为70 mL/250mL三角瓶、振荡培养转速为200 r/min,在粘质沙雷氏菌进行发酵36 h后,灵菌红素的产量最大为2.98 g/L。此时对应粘质沙雷氏菌的胞外脂肪酶最高活性为20 U/mL。(4)采用MTT法测定不同浓度的灵菌红素,对人肺癌细胞A-549和人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用。在最大血药浓度范围内,灵菌红素对人肺癌细胞A-549、人乳腺癌细胞MCF-7的最大抑制率分别为78%、83%。
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