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核苷酸具有许多重要的性质及功能,在细胞的构成、能量的产生与消耗、机体代谢、功能调节等方面都发挥着举足轻重的作用,使得核苷酸具有广泛的应用范围且与人类生活息息相关。核苷酸的生产通常是选用芽孢杆菌或者是产氨短杆菌,本实验室保藏的产氨短杆菌为野生型,发酵生产核苷酸能力很小,需经过诱变来改变菌的遗传性及其合成代谢途径,使该菌缺失合成途径中的某种中间产物,得到营养缺陷型菌株,从而能够大量积累所需产物。本文对产氨短杆菌发酵生产核苷酸进行了初步研究,主要包括高产核苷酸菌株的选育、种子培养基及发酵培养基的筛选、核苷酸发酵条件的优化、核苷酸测定方法的建立及利用混合菌株进行发酵罐培养等内容。产氨短杆菌的诱变选用了紫外诱变、紫外诱变结合微波诱变及硫酸二乙酯诱变,再经过青霉素富集诱变菌,通过补充培养基鉴定营养缺陷型。结果发现紫外诱变30 s后经10 s微波辐射诱变所得菌株更符合生产需求。优化了核苷酸基础测定和高效液相色谱法的检定条件,建立了测定核苷酸高效液相色谱法(HPLC)标准曲线。通过浸提溶液组成、浸提时间、浸提温度的考察,优化了浸提条件。可用0.1 mol/L磷酸二氢钾浸提液浸提40 min。通过流动相配比、流速和浸提时间的考察,优化了 HPLC的检定条件。检测波长260 nm,流动相为0.1 mol/L磷酸二氢钾:甲醇=9:1,流速为0.5 mL/min,柱温30℃。通过单因素试验、正交试验,得到液态发酵产核苷酸的最佳条件。种子培养基:可溶性淀粉2.0%、玉米浆3.0%、尿素0.2%、MgSO4·7H2O 0.2%、NaCl 0.2%,调节 pH 为 7.0发酵培养基为:糖蜜添加量为11%、棉籽蛋白粉为8%、MnS04为 0.01%、K2HPO41%、KH2PO4 1%、CaCl2 0.01%、MgS04·7H20 1%、余量为水,pH8.0。诱变产氨短杆菌单独接种发酵,最佳接种量6%、pH 8.0、以190rmp/min、32℃培养4天发酵效果最佳。若其他条件相同,培养温度为28℃时,培养30h后再将温度转为34℃培养48 h,缩短培养周期至78 h。诱变产氨短杆菌和枯草芽孢杆菌共以6%接种量接种,30℃培养3天与升温发酵78 h所得核苷酸产量相近。