心肌梗死的内皮祖细胞移植及法舒地尔对心肌梗死后心功能的影响

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目的观察法舒地尔(HF)对体外培养的人内皮祖细胞(EPCs)作用及对心肌梗死模型大鼠移植EPCs后心功能的影响,并探讨相关机制。方法(1)抽取健康志愿者和急性心肌梗死患者(发病12h内)外周血,利用差速贴壁法提取单个核细胞并培养内皮祖细胞,观察EPCs分化、增殖、凋亡及血管形成能力的变化,并观察法舒地尔(HF)对EPCs体外培养的影响;(2)选用SD大鼠60只制备心肌梗死模型,将模型成功的心梗大鼠随机分为四组:①对照组,腹腔注射生理盐水;②HF组,腹腔注射HF10mg/kg;③EPCs移植组,心肌内移植EPCs;④EPCs移植+HF组,心肌内移植EPCs并腹腔内注射HF(10mg/kg)。普食饲养14天。应用敲除小鼠β-半乳糖苷酶的来鉴别移植后的EPCs,通过培养敲除β-半乳糖苷酶基因小鼠外周血EPCs,并移植入心肌梗死模型大鼠的心肌内。检测各组心肌血流量(RMBF)、血管密度、纤维化程度及心功能。结果(1)差速贴壁筛选法获得并成功培养急性心肌梗死患者外周血中的EPCs,加入HF联合培养后,细胞的分化、增殖及血管形成能力明显高于未加入HF组(p<0.05),而细胞凋亡则低于未加入HF组(p<0.05);(2)EPCs移植+HF组的心肌血流量、新生血管密度增加,心肌纤维化程度降低。左心室舒张末内径(LVEDD)和收缩末的内径(LVESD)明显减小(p<0.05),射血分数(EF)提高,心功能有一定改善。结论(1)利用差速贴壁筛选法提取单个核细胞,成功分选并培养了不同时期的EPCs。(2)法舒地尔对心肌梗死患者体外EPCs培养,可促进细胞分化、增殖,降低细胞凋亡并提高血管形成能力。(3)法舒地尔对EPCs移植的心肌梗死大鼠,可增加其心肌血流量、心肌血管密度,降低心肌纤维化程度,进而改善心功能。(4)法舒地尔对体外EPCs培养和体内EPCs移植实验的效应,提示法舒地尔作为Rho激酶抑制剂,可能通过抑制Rho激酶的表达,提高内皮细胞eNOS的活性,辅助改善心肌梗死EPCs移植后的微环境,使EPCs移植后能更好地生存及分化,使EPCs能够更好地修复受损心肌细胞,促进血管新生,改善心肌供血,缩小梗死面积,限制心室重构等。这为心肌梗死患者EPCs移植联合HF治疗提供了一定的实验依据。
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