随着科学技术的发展,海洋微生物的研究和利用也越来越受到人们的重视,海洋中的微生物有着独特的特点,这些特点使得它们更容易被人们利用。随着人们对胶原蛋白的需求量的增加,胶原蛋白酶的研究也逐渐深入,常规提取胶原蛋白酶的微生物产量比较小,不容易提取。在前期工作中由本实验室筛选出来一株产胶原蛋白酶的DL-12沙雷氏菌是一株来自海洋的微生物。本实验中利用紫外诱变的方法处理DL-12嗜虫沙雷氏菌,定向筛选出高产胶原蛋白酶的菌株,对其产酶特性进行研究。对DL-12菌种进行紫外诱变处理,通过透明圈法进行初筛,鱼皮水解实验复筛,确定高产胶原蛋白酶的诱变菌株。通过对筛选出来的菌株进行酶活力比较,确定最佳诱变时间为45~55s。选出酶活力比出发菌有明显提高的3种菌株DL-12(50s)-3,DL-12(50s)-4和DL-12(55s)-5。然后对这3种菌株的产酶稳定性进行测定和比较,最后确定诱变菌种DL-12(50s)-4为实验菌种。诱变菌种DL-12(50s)-4产生胶原蛋白酶活力比出发菌有明显提高,并在其传代中稳定遗传。对DL-12(50s)-4诱变菌株进行培养基成分及条件优化。结果为:蔗糖4 g;牛肉膏10 g;氯化钠5 g;去离子水1L;pH:7.7。在最佳条件下进行培养测其胶原蛋白酶活力为98.76 U/ml。在最佳条件下对DL-12(50s)-4进行大量发酵培养,培养42 h后对发酵液进行离心,用磷酸缓冲液进行溶解,放入透析袋中进行透析得到粗酶液,酶活力可以达到483.9U/ml。胶原蛋白酶具有着重要应用研究价值。诱变菌种DL-12(50s)-4在培养中,将胶原蛋白酶可分泌到其胞外,因此通过液体发酵可大量获得胶原蛋白酶,同时容易分离纯化。现在生产胶原蛋白酶的产生菌源较少,因此将诱变菌DL-12(50s)-4用于生产胶原蛋白酶有很大的应用价值。