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第一部分CRM1基因在急性髓细胞白血病中功能机制的研究目的:研究核转运信号蛋白1（CRM1）在急性髓细胞白血病中的作用,探讨其抑制剂KPT-330对急性髓细胞白血病细胞凋亡的诱导作用及可能的分子机制。方法:Western blot检测CRM1在白血病细胞株和正常人骨髓细胞中的表达水平。用不同浓度的KPT-330孵育处理白血病细胞,抑制CRM1的表达,细胞增殖试剂盒（CCK-8）检测白血病细胞的增殖情况;应用荧光显微镜观察KPT-330作用后的白血病细胞形态;用Annexin V-FITC/PI标记流式细胞术检测细胞凋亡情况;碘化丙啶染色后流式细胞术分析细胞周期;Western blot检测KPT-330孵育后白血病细胞株凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3和PARP的表达水平和活化状态;基因芯片分析KPT-330抑制CRM1后白血病细胞基因表达谱及长链非编码RNA（Lnc RNA）表达谱的变化。结果:CRM1在NB4、K562、HL-60以及CCRF等多种白血病细胞株中均有较高水平的表达,而在正常人骨髓细胞中几乎不表达。KPT-330可以显著抑制CRM1的表达,并呈剂量依赖性抑制白血病细胞的生长;与对照组相比,抑制CRM1后,白血病细胞出现了明显的形态异常,且细胞凋亡率增加,0.2μmol/L KPT-330 24h处理组NB4、K562、HL-60细胞凋亡率分别为（4.95±0.21）%、（14.05±0.07）%、（4.95±0.63）%;0.2μmol/L KPT-330 48h处理组NB4、K562、HL-60细胞凋亡率分别为（6.10±0.56）%、（20.75±0.21）%、（5.85±0.07）%;1.0μmol/L KPT-330 24h处理组NB4、K562、HL-60细胞凋亡率分别为（41.15±0.21）%、（35.45±0.35）%、（15.65±0.07）%;1.0μmol/L KPT-330 48h处理组NB4、K562、HL-60细胞凋亡率分别为（52.45±0.35）%、（47.45±2.47）%、（16.80±1.98）%,与对照组[24h NB4、K562、HL-60:（3.30±0.28）%、（9.50±0.56）%、（2.00±0.14）%;48h NB4、K562、HL-60:（3.70±0.14）%、（3.50±0.28）%、（2.15±0.21）%]相比,差异均有统计学意义（均P<0.05）。细胞周期研究发现,KPT-330抑制CRM1后,三种白血病细胞均出现G2期细胞显著减少及subG1期细胞增加;在CRM1抑制组,活化型Caspase-3、Caspase-9和PARP蛋白的表达水平增加。基因芯片分析发现:KPT-330抑制CRM1后,mRNA和LncRNA的表达谱发了生显著变化,差异基因参与的重要信号通路包括Toll样受体信号以及谷胱甘肽代谢等。结论:CRM1在急性髓细胞白血病细胞的增殖中起重要作用,抑制CRM1表达可导致白血病细胞凋亡;CRM1抑制剂KPT-330具有抑制白血病细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,其诱导白血病细胞凋亡的机制可能与Toll样受体信号以及谷胱甘肽代谢信号通路等相关。第二部分MYBL2基因在急性髓细胞白血病中作用机制的初步探讨目的:研究MYBL2基因在急性髓细胞白血病细胞株的表达情况及其表达沉默后对细胞增殖和周期的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:运用Western blot检测各白血病细胞株中MYBL2蛋白的表达水平。选择高表达的NB4、K562白血病细胞株,通过含Si RNA慢病毒感染的方法干扰MYBL2的表达。Si-MYBL2组为经MYBL2-Si RNA慢病毒转染的白血病细胞,Si-NC组为经阴性对照慢病毒转染的白血病细胞。应用荧光显微镜观察Si-MYBL2组与对照组间细胞形态的变化;CCK8法检测Si-MYBL2组与对照组间细胞增殖的差异;碘化丙啶染色后用流式细胞仪分析MYBL2基因沉默后白血病细胞周期的变化;Hoechst 33342荧光染色法观察细胞核的形态变化。Western blot检测Si RNA慢病毒感染后MYBL2在蛋白水平的表达情况,以及Si-MYBL2组和对照组细胞周期相关蛋白C-MYC、PLK1的表达水平及ERK的磷酸化水平。结果:MYBL2基因在NB4、K562等白血病细胞株中高表达。相对于Si-NC组,MYBL2基因被成功干扰后的白血病细胞体积明显变大;MYBL2-Si RNA慢病毒感染白血病细胞96小时后,细胞的增殖能力显著下降（P<0.05）,与Si-NC组相比,差异有统计学意义;抑制MYBL2基因表达,白血病细胞周期阻滞在G1期,细胞周期进程延缓（P<0.05）,差异有统计学意义;Hoechst 33342染色后,观察到Si-MYBL2组的细胞核体积增大且不规则。这提示了MYBL2可能通过调控细胞周期机制促进白血病细胞增殖。抑制白血病细胞中MYBL2基因表达后,细胞周期相关蛋白C-MYC、PLK1的表达水平下降,而ERK的磷酸化水平显著升高,具体作用机制需要进一步实验进行研究。结论:在体外,MYBL2基因在白血病细胞的增殖中起重要作用,可以影响细胞周期分布,抑制MYBL2基因表达,细胞周期阻滞于G1期,细胞的增殖能力显著下降;MYBL2基因与C-MYC及PLK1基因共同作用参与调控白血病细胞周期;MYBL2基因可能通过ERK细胞信号通路调控白血病细胞增殖周期。