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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染所引起的一种高度接触性传染病。该病主要表现为妊娠母猪出现妊娠中断，其余阶段猪群出现呼吸症状，对我国规模化生猪养殖业造成重大的经济损失。目前针对PRRS的流行病学有较为详细研究，但仍缺乏快速高效、敏感特异的检测诊断方法。因此，根据现阶段需要本研究进行了三个方面的探索：
(1)使用PRRSVORF7基因片段，构建实时荧光定量PCR和常规RT-PCR特异性引物。通过敏感性、特异性实验条件的摸索，两种特异性引物扩增的目的片段分别为210bp和520bp，使用两种方法对部分临床样品进行对比检测，结果显示实时荧光定量PCR阳性率为25%，而常规RT-PCR的阳性率仅为10%。
(2)使用PRRSVNSP2基因片段，构建PRRS毒株鉴别PCR方法，结果表明PRRS经典毒株与变异毒株PCR扩增目的带分别为500bp和410bp；并采集某集团规模化猪场9个省区共509份不同类型样品，运用构建的引物进行临床样品的阳性筛选，共检测出阳性样品144份，占样品总数的28.29%。其中经典毒株43份，变异毒株101份，分别占样品总数的8.45%、19.84%。
(3)使用PRRSVORF5基因，建立用于PRRSVORF5基因序列比对分析的特异性引物，其目的带为730bp。选择临床阳性样品进行序列测定，通过ORF5基因序列比对后，显示河南省的3条序列均为类NADC30毒株；湖北省具有1条高致病性变异毒株及3条类NADC30毒株：山东省序列比对后,具有1条高致病性变异毒株及1条类NADC30毒株；湖南省测序比对后，结果为1条高致病性变异毒株；江西的毒株测序比对后，结果为1条经典毒株。
本研究成功建立了PRRSVORF7基因实时荧光定量PCR，有效提高了对PRRSV的检测敏感性，增加了PRRS检测方法的多样性；使用设计的PRRS经典和变异毒株反转录PCR(Reverse transcription PCR)鉴别引物和PRRSVORF5基因序列比对引物分别对某集团规模化猪场临床样品进行病原学调查以及遗传进化分析。所得结果可以为某集团制定有效的PRRS防控措施以及净化方案提供数据参考。
(1)使用PRRSVORF7基因片段，构建实时荧光定量PCR和常规RT-PCR特异性引物。通过敏感性、特异性实验条件的摸索，两种特异性引物扩增的目的片段分别为210bp和520bp，使用两种方法对部分临床样品进行对比检测，结果显示实时荧光定量PCR阳性率为25%，而常规RT-PCR的阳性率仅为10%。
(2)使用PRRSVNSP2基因片段，构建PRRS毒株鉴别PCR方法，结果表明PRRS经典毒株与变异毒株PCR扩增目的带分别为500bp和410bp；并采集某集团规模化猪场9个省区共509份不同类型样品，运用构建的引物进行临床样品的阳性筛选，共检测出阳性样品144份，占样品总数的28.29%。其中经典毒株43份，变异毒株101份，分别占样品总数的8.45%、19.84%。
(3)使用PRRSVORF5基因，建立用于PRRSVORF5基因序列比对分析的特异性引物，其目的带为730bp。选择临床阳性样品进行序列测定，通过ORF5基因序列比对后，显示河南省的3条序列均为类NADC30毒株；湖北省具有1条高致病性变异毒株及3条类NADC30毒株：山东省序列比对后,具有1条高致病性变异毒株及1条类NADC30毒株；湖南省测序比对后，结果为1条高致病性变异毒株；江西的毒株测序比对后，结果为1条经典毒株。
本研究成功建立了PRRSVORF7基因实时荧光定量PCR，有效提高了对PRRSV的检测敏感性，增加了PRRS检测方法的多样性；使用设计的PRRS经典和变异毒株反转录PCR(Reverse transcription PCR)鉴别引物和PRRSVORF5基因序列比对引物分别对某集团规模化猪场临床样品进行病原学调查以及遗传进化分析。所得结果可以为某集团制定有效的PRRS防控措施以及净化方案提供数据参考。