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慢性淋巴细胞白血病（CLL,简称慢淋）是一种克隆性淋巴细胞增殖性肿瘤,95%以上为B细胞CLL,仅不到5%的病例为T细胞CLL。西方国家CLL占其所有白血病的25%～30%,发病率比印度、中国和日本高10～30倍。慢淋中位发病年龄65～70岁,男女比例约2:1,起病隐匿,总体预后相对较好。但B—CLL具有显著的预后差异,生存期可长达十余年,也可短至5、6年。如何预测预后或以何指标来判断预后是近年的研究热点。ZAP-70（zata chain associated protein-70）是一种70KDa蛋白酪氨酸激酶（PTK）,表达在正常T细胞和NK细胞中,而正常B淋巴细胞缺乏。ZAP-70在Syk缺陷的B-CLL的B淋巴细胞中,能代替Syk重新构建BCR信号传导通路,从而发挥其刺激淋巴细胞生长、增殖及癌变的生物学效应。CD38系淋巴细胞表达的一种Ⅱ型跨膜糖蛋白,早期研究认为可以作为B细胞慢淋的预后指标,但近来在其与B细胞慢淋的病程进展和预后方面出现一些争议。2004年英国CLL临床指南及2006年美国CLL临床实践指南提出,性别、临床分期、淋巴细胞形态、骨髓浸润程度、淋巴细胞倍增时间、血清学指标、CD38比例、ZAP—70表达、细胞遗传学异常、IgVH基因突变状态可作为B细胞慢淋的预后因素。以IgVH基因突变状态被认为最具预后价值,但此项检查费用高,难度大,尚难在临床普遍应用。国外因慢淋患者相对较多,针对ZAP-70和CD38在B细胞慢淋的表达,以及是否可代替IgVH基因突变状态作为B细胞慢淋独立预后指标的研究开展较多,国内因慢淋患者相对较少研究开展不多。本研究拟探讨这2种指标在B细胞慢淋患者的表达、相互关系及与临床分期、淋巴细胞形态、血清乳酸脱氢酶（LDH）、临床治疗疗效等的关系及意义。材料与方法1、病例2006年11月至2007年8月资料完整的住院及门诊确诊的B细胞慢性淋巴细胞白血病患者20例,女性8例,男性12例,年龄47岁—76岁。初诊患者11例,复诊并已经接受过化疗的患者9例。B-CLL的诊断和分期均按照《血液病诊断与疗效标准》,并排除其他慢性B细胞淋巴瘤和白血病等其他疾病。其中BinetA期5例,BinetB期8例,BinetC期7例。2、实验方法分析ZAP-70及CD38二种指标在B细胞慢淋患者中的表达、相互关系及与临床分期、淋巴细胞形态、血清乳酸脱氢酶（LDH）、临床治疗疗效等的关系。抽取B细胞性慢淋患者骨髓液或外周血2ml,肝素抗凝,调整细胞数至1×106/ml,取100μl,加入CD3-APC、CD19-FITC、CD38-TC各20ul,室温避光孵育15分钟,加入Fix＆Perm A固定液100ul,室温避光孵育10分钟,加入PBS 2ml洗涤,1200 rpm离心5分钟,去上清,加入Fix＆Perm B破膜剂100 ul和ZAP-70-PE抗体5 ul,室温避光孵育20分钟,再加2ml PBS,以1200 rpm离心5分钟,去上清,1mL PBS重悬细胞,在流式细胞仪(美国BD（Becton—Dickinson）公司FACSCaliburTM)上检测其表达,以K-S统计法（CellQuest软件内附带的一种荧光之间强度比较的统计学方法）,比较B淋巴细胞和T淋巴细胞之间的D值,参照文献以D值＞0.84为ZAP-70阴性,D值≤0.84作为ZAP-70阳性标准;直接分析B淋巴细胞群CD38的表达率,CD38表达率以≥20%作为阳性标准,＜20%为阴性。取患者外周血以Beckman公司全自动生化仪检测LDH水平,按患者LDH是否升高将患者分为≥225IU/L和＜225IU/L两组。瑞氏染色外周血涂片进行淋巴细胞形态观察,定义伴不典型淋巴细胞的B-CLL为:幼淋细胞占10%以上,或者淋巴浆细胞样分化和（或）核分裂的淋巴细胞占15%以上。所有数据采用SPSS10.0软件包进行统计学分析。结果1、20例B细胞慢性淋巴细胞白血病患者ZAP-70的阳性表达情况20例B-CLL患者流式细胞仪ZAP-70检测结果,D值平均值为0.72±0.16,部分患者阳性表达,其中ZAP-70阳性共14例（70.0%）,所有以其中D值≤0.50的阳性患者定为强阳性共2例（10%）,ZAP-70阴性患者6例（30.0%）。2、20例B细胞慢性淋巴细胞白血病患者中CD38的阳性表达情况20例B-CLL患者流式细胞仪CD38检测结果,CD38检测的平均值为26.09±37.79%,部分患者呈阳性表达,CD38阳性共9例（45.0%）,CD38阴性患者11例（55.0%）。3、20例B细胞慢性淋巴细胞白血病患者ZAP-70、CD38表达水平相关情况的分析:对20例B细胞慢淋患者的ZAP-70的D值和CD38的表达百分数值两者之间统计学分析表明无相关性（r=—0.340,P=0.142）。按拟定的阈值水平对20例慢淋患者分四组,ZAP-70阳性CD38阳性患者组共8例（40%）,ZAP-70阴性CD38阴性患者组共5例（25%）,ZAP-70阳性CD38阴性患者组共6例（30%）,但此组6例患者ZAP-70的阳性值仅波动在0.51～0.83之间,无强阳性出现,ZAP-70阴性CD38阳性组仅1例（5%）。4、20例B细胞慢性淋巴细胞白血病中ZAP-70与CD38表达与其他临床指标关系ZAP-70表达阳性与年龄及性别无关,与临床分期、淋巴细胞形态、LDH水平有关;CD38表达阳性与年龄、性别、临床分期、淋巴细胞形态及LDH水平无关。5、20例B细胞慢性淋巴细胞白血病患者的临床治疗及现状B细胞慢淋患者Binet B+C期中ZAP-70及CD38阳性表达相对较高,以氟达拉滨为主的化疗短期内有效,缺乏长期随访。ZAP-70和CD38双阳性患者相对预后差。小结1、以流式细胞仪行B细胞慢淋患者的ZAP-70和CD38表达检测,方法简捷经济,便于临床推广。2、部分B细胞慢淋患者ZAP-70呈阳性表达。ZAP-70表达阳性与年龄及性别无关。ZAP-70阳性患者多伴高危因素,处于Binet B和C期,伴随不典型的淋巴细胞形态和高的LDH值,提示预后不佳,有助于对B细胞慢淋患者的预后判断。3、部分B细胞慢淋患者CD38呈阳性表达,CD38表达阳性与年龄、性别、临床分期、不典型淋巴细胞形态及LDH水平无关,与预后关系有待进一步研究。4、本研究20例B细胞慢淋患者的ZAP-70的D值和CD38表达百分数值两者之间无相关性。5、本研究20例B细胞慢淋患者Binet B+C期中ZAP-70及CD38阳性表达相对较高,以氟达拉滨为主的化疗短期内有效,缺乏长期随访。ZAP-70和CD38双阳性患者相对预后差。综上所述,B细胞慢性淋巴细胞白血病患者ZAP-70和CD38的表达部分呈阳性,结合其他临床预后指标关系分析及文献,表明ZAP-70是否阳性有助于对B细胞慢淋患者的预后判断,需要提高对这些ZAP-70阳性患者的个体治疗,并且ZAP-70有可能成为将来B细胞慢淋患者新的治疗靶点。而CD38的预后价值尚有争议,尚需要增加病例数、长期的生存随访分析,并确定合适的阈值。