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目的:本次研究的主要目的有:1尝试用“不规则喂养配合夹尾刺激法”建立FD动物模型。2研究调气类方(四逆散、枳术丸、小陷胸汤)治疗FD的物质基础和作用机制,探寻调理气机法治疗FD的科学依据。方法实验一:功能性消化不良动物模型的改进第一步:动物模型的建立健康清洁级雄性Wistar大鼠32只,平均体重200克,随机分为4组,每组8只,分别称作:1.正常组(NG),正常喂养。2.不规则喂养组(IG):单日喂食,双日禁食。3.夹尾刺激组(CG):正常喂养,每日用长镊子钳夹大鼠尾巴末端1/3处,每次30分钟,隔半小时一次,4小时后停止。4.不规则喂养配和夹尾刺激组(ICG):单日喂食,双日禁食,禁食日用夹尾刺激,每次10分钟,隔1小时一次,4小时后停止。观察大鼠饮食量、体重、毛色、粪便以及性情的变化。第二步:动物模型的验证将上述4组大鼠禁食水24小时,然后用1g/ml淀粉糊剂灌胃(10ml/kg),静置1小时后,断头处死,剖开腹腔,结扎贲门和幽门,将胃取出,称重;剪开胃壁,用蒸馏水洗去胃内容物,用滤纸吸干,再称空胃的重量,计算胃排空率,并观察胃黏膜。实验二:调气类方调治功能性消化不良的物质基础及作用机制的实验研究第一步:造模和治疗健康清洁级雄性Wistar大鼠48只,平均体重200克,随机分成6组,每组8只。取一组作为空白对照组(BG),正常喂养14天。余下5组按“不规则喂养配合夹尾刺激法”造模14天。空白组用生理盐水灌胃14天;其余5组分别称为模型对照组(MG)、四逆散组(SG)、枳术丸组(ZG)、小陷胸汤组(XG)、多潘力酮组(DG),分别采用生理盐水、四逆散水煎液、枳术丸水煎液、小陷胸汤水煎液、多潘力酮溶液灌胃14天。治疗前后观察各组大鼠一般状况,体重和饮食量。第二步:指标检测胃排空实验:将上述6组大鼠禁食水24小时,后用淀粉糊剂(1g/ml)以10mg/kg灌胃,静置1小时后,断头处死,先取血4ml,放入抗凝管内冷藏备用待测NO、AchE、MTL;剖开腹腔,取胃,称重;剪开胃壁,洗去内容物,再称空胃重,计算胃排空率,并观察胃黏膜。剪下胃窦部放入10%甲醛溶液中固定,其余胃组织研制成10%组织匀浆备用待测NO、AchE。采用硝酸还原酶法检测胃壁组织和血清内NO含量,采用化学比色法检测胃壁组织和血浆内AchE活性;采用放免法检测血浆内MTL含量。胃窦组织结构观察:将排空实验中留取的胃窦标本取出,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,4μm切片,HE染色,在光学显微镜下观察胃窦组织结构。结果实验一1大鼠一般状况及胃黏膜形态NG大鼠饮食量稳定;毛色洁白光亮,柔软光滑;粪便成形,气味不大;性情较温和,精神状态良好;胃黏膜淡红色,未见充血水肿,表面完整。IG大鼠上述各项未见明显改变;CG大鼠和ICG大鼠进食紊乱,饮水量增加;毛色发黄干枯;粪便不成形,臭秽难闻;性情暴躁,精神疲惫;胃黏膜充血水肿,CG大鼠出现糜烂和溃疡。体重增加值比较(g): IG(22.99±4.51),CG(12.26±5.32)和ICG(17.54±8.77)均明显低于NG(33.71±7.45) (P<0.01);造模各组之间比较,CG明显低于IG(P<0.01)。2大鼠胃排空率的比较(%)与NG(27.00±4.06)相比,CG(15.94±4.09)和ICG(20.88±1.19)明显降低(PCG<0.01,PICG<0.05)。造模各组之间比较,CG明显低于IG(24.75±1.10) (P<0.01)。实验二1一般状况和胃黏膜形态空白组大鼠饮食量稳定上升;体重明显增加;毛色洁白,柔软光滑;粪便成形,气味不大;性情较温和,精神良好;胃黏膜淡红色,表面完整。模型组大鼠进食紊乱,饮水量增加;体重增长缓慢;毛色发黄干枯;粪便不成形,臭秽难闻;性情暴躁,精神疲惫;胃黏膜充血水肿,表面完整。多潘力酮组和三个中药组治疗前与模型组基本相同,经过治疗饮食量、体重、毛色、粪便均有所改善。性情较治疗前温和,精神好转。胃黏膜略红,表面完整。2胃排空率(%)与模型组(16.25±3.82)比较,四逆散(26.19±0.84)、枳术丸(25.50±1.00)、小陷胸汤(25.38±1.19)都能明显升高胃排空率(PSG<0.01,PZG,XG<0.05),其中四逆散明显优于多潘力酮(22.69±0.96) (P<0.01)。三方之间是等效的(P>0.05)。3胃组织和血清中NO含量胃组织(μmol/gprot):与模型组(4.08±0.23)相比较,四逆散(2.80±0.20),枳术丸(3.10±0.24),小陷胸汤(3.39±0.14)都能显著降低胃组织NO含量(P<0.01),且都明显优于多潘力酮(3.68±0.23) (P<0.01)。三方之间比较,作用由强至弱为:四逆散、枳术丸、小陷胸汤(P<0.05)。血清(μmol/L):与模型组(59.75±10.96)相比较,四逆散(42.56±4.55)、枳术丸(45.53±5.34)、小陷胸汤(46.64±10.37)均能显著降低血清NO含量(P<0.05),且与多潘力酮(47.52±9.59)等效(P>0.05)。三方之间也是等效的(P>0.05)。4胃组织和血浆中AchE活性胃组织(U/mgprot):与模型组(0.74±0.11)相比较,四逆散(0.88±0.07)、枳术丸(0.87±0.06)、小陷胸汤(0.84±0.06)均能明显升高胃组织AchE活性(P<0.05),相应增加Ach含量,且与多潘力酮(0.85±0.09)等效(P>0.05)。三方之间也是等效的(P>0.05)。血浆(U/ml):与模型组(7.02±0.90)相比较,四逆散(11.43±1.80)、枳术丸(9.96±2.20)、小陷胸汤(8.96±1.60)均能明显增强血浆AchE活性(PXG<0.05,其余P<0.01),相应增加Ach含量;其中四逆散优于多潘力酮(9.37±2.33)(P<0.05)。三方之间比较,四逆散明显优于小陷胸汤(P<0.01)。5血浆MTL含量(pg/ml)与模型组(385.21±10.98)相比较,四逆散(430.04±8.25)、枳术丸(422.04±12.46)、小陷胸汤(417.67±9.05)均能显著升高血浆MTL含量(P<0.01),其中四逆散和枳术丸明显优于多潘力酮(408.29±11.11) (PSG<0.01,PZG>0.05)。三方之间比较,四逆散明显优于小陷胸汤(P<0.05)。6胃窦组织结构模型组大鼠胃窦黏膜层完整,可见充血水肿和炎细胞浸润。多潘力酮组和三个中药组黏膜层完整,未见充血、水肿及炎细胞浸润。结论1“不规则喂养配和夹尾刺激法”较之以往各种造模方法更适合于建立FD动物模型。本方法与FD发病特点接近,操作较简便,实验周期不长;大鼠一般状况,胃黏膜形态和胃排空率改变明显;可控性好,不易发生意外。2四逆散、枳术丸和小陷胸汤能改善FD大鼠一般状况和胃黏膜形态;提高其胃固体排空率;减轻NO对胃排空的抑制;增强Ach和MTL含量,促进胃排空。其中以四逆散综合效果最佳,在提高胃固体排空率,降低胃组织NO,增强血浆中AchE和MTL方面明显优于多潘力酮。枳术丸在降低胃组织NO和增强血浆MTL方面优于多潘力酮。小陷胸汤与多潘力酮等效。临床上可根据辨证分型的结果选择应用或适当配伍以增强疗效。