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本研究以冬凌草甲素为研究材料,采用Hepa1c1c7细胞模型,通过细胞信号转导通路,研究冬凌草甲素诱导QR机理。同时以柚花香、棕蓑挟乌龙茶香气及其中主要单体为研究材料,采用Hepa1c1c7和RAW264.7细胞模型,筛选分离活性组分。利用HepG2、MDA-MB-231、HCT116细胞模型,评价香气单体间、香气单体与冬凌草甲素间的抗癌相互作用。得到主要结论如下:1、冬凌草甲素诱导QR机理研究(1)冬凌草甲素浓度为0.94μg/mL时显著诱导QR活性倍增。1.25μg/mL冬凌草甲素与10μM的PI3K抑制剂处理后抑制QR活性最明显,与60μM的ERK抑制剂处理后促进QR活性最明显,测得QR活性分别为冬凌草甲素单独处理组的0.77倍和1.46倍。冬凌草甲素不通过p38、PKC和JNK通路影响QR活性。(2)0~12h范围内,冬凌草甲素诱导Nrf2蛋白入核积累,在第9h时Nrf2蛋白表达量最高,为对照组的4.43倍;5μg/mL冬凌草甲素显著促进Keap1mRNA表达并降低细胞内的Keap1蛋白含量,相对表达量分别为对照组的1.47倍和0.28倍。(3)2.5μg/mL冬凌草甲素显著促进Hepa1c1c7细胞中NQO1的mRNA和蛋白表达水平,相对表达量分别为对照组的3.47和2.56倍。2、柚花香乌龙茶香气抗癌抗炎功能特性研究(1)柚花香乌龙茶香气浓度为15μg/mL时显著诱导QR活性倍增。香气在62.5~1000μg/mL浓度范围内对HCT116、MDA-MB-231细胞增殖抑制率最高达到68%和70%。25μg/mL香气分别与5μM的p38和2.5μM的PI3K抑制剂处理后抑制QR活性最明显,测得QR活性分别为香气单独处理组的0.69倍和0.67倍。(2)采用化学法、TLC法分离的6种香气产物均在12.5~25μg/mL浓度范围内诱导QR倍增。测定的芳樟醇、橙花叔醇、吲哚、苯并噻唑、柠檬烯、苯甲醇、2-戊基呋喃、二丙酮醇等8种单体中,芳樟醇抗癌活性最强,在30.8-61.6μg/mL范围内诱导QR倍增;橙花叔醇抗炎活性最强,在44.4-55.5μg/mL范围内NO抑制率达到50%;按芳樟醇:橙花叔醇:吲哚=7.2:4.8:8.0比例混合,混合组分在12.5~25.0μg/mL范围内即诱导QR活性倍增,在25~50μg/mL范围内NO抑制率达到50%,具有较强的抗癌抗炎活性。3、棕蓑挟乌龙茶香气抗癌抗炎功能特性研究(1)GC-MS分析表明,初提香气和中性组分的醇类占多数,相对含量分别为44.28%和48.26%;碱性组分中含有较多的邻二甲苯、醇类,相对含量分别为28.48%和17.88%;酸性组分中羧酸类化合物、邻二甲苯含量较高,相对含量分别为22.55%和14.25%。(2)诱导qr倍增浓度范围:初提香气和中性组分为12.5~25μg/ml,碱性和酸性组分为25~50μg/ml,tlc分离产物f1、f3为6.25~12.5μg/ml,二级tlc分离产物f1-1为6.25~12.5μg/ml、f1-2、f3-2为12.5~25μg/ml。no抑制率达到50%的浓度范围:初提香气和中性、碱性组分为25~50μg/ml,酸性组分为12.5~25μg/ml,tlc分离产物f1、f3为50~100μg/ml,二级tlc分离产物f1-2为25~50μg/ml、f1-1、f3-2为50~100μg/ml。对hct116抑制率达到50%浓度范围:初提香气、中性组分为125~250μg/ml。对mda-mb-231抑制率达到50%浓度范围:中性组分为125~250μg/ml。4、香气单体间、香气单体与冬凌草甲素间抗癌相互作用研究(1)茶叶中的香气单体:吲哚、α-法尼烯、亚麻酸甲酯诱导qr倍增浓度分别为42.42、25.48、30.52μg/ml,no抑制率达到50%的浓度分别为85.42、59.7、74.43μg/ml。(2)作用hepg2、hct116和mda-mb-231细胞24、48、72h后,吲哚、α-法尼烯、亚麻酸甲酯均在作用时间72h、作用浓度150μg/ml时表现出对癌细胞的最高增殖抑制率。hepg2细胞最高增殖抑制率分别为33.01%、79.15%和82.35%;hct116细胞最高增殖抑制率分别为71.90%、99.30%和99.77%;mda-mb-231细胞最高增殖抑制率分别为53.71%、95.44%和98.11%。α-法尼烯和亚麻酸甲酯的最高抑制增殖效果相当,而吲哚弱于前两者。(3)实验浓度范围内,香气单体间、香气单体与冬凌草甲素间协同抑制hepg2细胞增殖效果最强的组合分别是:吲哚150μg/ml+α-法尼烯150μg/ml、吲哚100μg/ml+冬凌草甲素10μg/ml,增殖抑制率分别达到96.3%、99.8%,ci值分别为0.556、0.391。协同抑制hct116细胞增殖效果最强的组合分别是:吲哚144.54μg/ml+α-法尼烯116.38μg/ml、吲哚144.54μg/ml+冬凌草甲素14.46μg/ml,抑制细胞增殖率分别达到99.1%、99.7%,ci值分别为0.168、0.067。协同抑制mda-mb-231细胞增殖效果最强的组合分别是:吲哚144.54μg/ml+α-法尼烯116.38μg/ml、吲哚144.54μg/ml+冬凌草甲素14.46μg/ml,抑制细胞增殖率分别达到99.6%、99.9%,ci值分别为0.443、0.500。(4)实验浓度范围内,当ed50的ci值小于1时,香气单体间、香气单体与冬凌草甲素间协同抑制hepg2细胞增殖对应dri值最大的组合分别是吲哚+α-法尼烯、吲哚+冬凌草甲素,DRI值分别为3.08、1.74和6.59、2.41。协同抑制HCT116细胞增殖对应DRI值最大的组合分别是α-法尼烯+亚麻酸甲酯、吲哚+冬凌草甲素,DRI值分别为1.81、1.81和2.34、2.35。当ED50的CI值大于1时,香气单体间、香气单体与冬凌草甲素间抑制MDA-MB-231细胞增殖拮抗作用最强烈的组合分别是α-法尼烯+亚麻酸甲酯、亚麻酸甲酯+冬凌草甲素,CI值分别为3.312、1.958;拮抗程度较低的组合分别是吲哚+α-法尼烯、吲哚+冬凌草甲素,CI值分别为1.550、1.266。