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目的:探讨不同剂量的TNBS直肠灌注诱导BALB/C小鼠炎症性肠病模型的特点,从疾病活动指数、生存率、肠道黏膜病理改变等方面综合评估,选择最佳造模剂量,建立最适于本实验要求的动物模型。方法:将禁食24小时、不禁饮的BALB/C小鼠随机分为5组,每组16只。第一组直肠灌注1.0mgTNBS+50%乙醇溶液,第二组直肠灌注1.5mgTNBS+50%乙醇溶液,第三组直肠灌注2.0mgTNBS+50%乙醇溶液,第四组直肠灌注2.5mgTNBS+50%乙醇溶液,对照组直肠灌注生理盐水,观察各小鼠每日表现、称重、化验大便常规、潜血。灌肠后第二天起每天统计生存率,第7天统计总生存率,并处死小鼠,收集标本,光镜下观察肠黏膜病理特征并评分,检测各组小鼠肠黏膜内NF-κB p65的表达,分析结果。结果:各组小鼠(按TNBS lmg、1.5mg、2.0mg、2.5mg组、空白对照顺序排列)DAI评分:5.12±0.68、6.36±0.71、11.54±1.28、12.75±1.62、0;病理病理评分:4.26±0.78、5.26±0.98、10.32±1.15、10.72±1.35、1.95±0.50;生存率:100%、93.7%、62.5%、37.5%、100%,NF-κB p65阳性细胞表达评分:23.06±2.88、25.26±2.37、50.26±4.26、55.26±4.68、1.26±0.86。从结果可以发现:随着TNBS剂量的增加,DAI评分、肠道病理评分逐渐升高,TNBS lmg、1.5mg组与TNBS 2.0mg、2.5mg组相比差异有统计学意义(P<0.05),与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);TNBS l.0mg、1.5mg组和TNBS 2.0mg、2.5mg组两组组内比较差异无统计学意义(P>0.05)。随着剂量的增加,小鼠的生存率急剧下降,其中2.0mg组与l.0mg、1.5mg、2.5mg组相比差异有统计学意义(P<0.05);而NF-κB p65在2.0mg、2.5mg组间相比差异无统计学意义(P>0.05),与lmg、1.5mg组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:综合比较各组小鼠的疾病活动指数、生存率、病理变化等指标,TNBS 2.0mg能够诱导出理想的适宜研究的动物模型。因此确定TNBS 2.0mg是最佳的造模剂量。目的:探讨NF-κB p65反义寡核苷酸对TNBS诱导BALB/C小鼠炎症性肠病模型肠道炎症,TNF-α、IL-1βmRNA及NF-κB p65、TNF-α、IL-10、IL-1β蛋白表达表达的影响,研究其对实验性小鼠结肠炎的治疗效果及机制。方法:建立2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)炎症性肠病小鼠模型,将造模成功的36只BALB/C小鼠随机分为模型对照组(UC组)、NF-κB p65反义寡核苷酸组(ASODN组),错义寡核苷酸组(MSODN组),另设正常对照组(NC组)。ASODN组、MSODN组小鼠分别于造模后24小时,采用反义寡核苷酸、错义寡核苷酸灌肠治疗,观察各小鼠每日表现、称重、化验大便常规、潜血;于灌肠后第7天处死小鼠,光镜下观察肠道炎症并评分,逆转录聚合酶链反应(RT-PCT)检测结肠组织TNF-α、IL-1βmRNA表达,免疫组化法检测肠黏膜中TNF-α、IL-1β、IL-10、NF-κB p65阳性细胞表达,Western blot检测小鼠结肠组织核蛋白中NF-κB p65的表达水平。分析检测结果。结果:各组小鼠(按NC组、ASODN组、MSODN组、UC组顺序排列)DAI评分为:1.02±0.26、4.36±0.54、11.76±1.21、12.02±1.18;病理评分为:1.95±0.50、5.26±0.88、10.40±1.28、10.32±1.25;RT-PCR检测TNF-αmRNA表达为:0.36±0.04、0.64±0.05、1.29±0.05、1.25±0.07,IL-1βmRNA表达为:0.21±0.04、0.46±0.03、1.00±0.07、1.00±0.03;免疫组化检测TNF-α阳性细胞为:64.17±11.29、82.68±14.30、166.49±11.63、168.48±11.89,IL-1β阳性细胞为:11.68±3.52、42.42±5.77、120.43±28.2、115.74±27.63,IL-10阳性细胞为:168.32±10.66、146.68±6.02、58.44±10.92、62.50±11.57,NF-κB p65阳性细胞为: 2.42±1.37、22.66±5.32、61.09±3.73、58.38±4.49;Western blot检测核内NF-κB p6蛋白水平为:0.372±0.02、1.05±0.09、2.34±0.09、2.36±0.08。从结果发现ASODN组DAI、肠道病理评分、TNF-α、IL-1βmRNA、TNF-α、IL-1β阳性细胞、NF-κB p65阳性细胞及核蛋白内NF-κB p65蛋白水平较UC组、MSODN组明显降低(P<0.05),高于NC组(P<0.05),差异有统计学意义,;而IL-10阳性细胞较UC组、MSODN组高(P<0.05),低于NC组(P<0.05),差异有统计学意义;而UC组、MSODN组组内各项指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)结论:1、NF-κBp65 ASODN干预TNBS诱导的炎症性肠病模型小鼠,小鼠结肠黏膜中NF-κB p65的表达减少,提示NF-κBp65 ASODN干预可抑制NF-κB的活化。2、NF-κBp65 ASODN干预后,小鼠结肠黏膜中促炎细胞因子TNF-α、IL-1β的表达下调,抑炎细胞因子IL-10的表达上调,病理组织学明显改善,临床症状明显减轻,提示NF-κB p65 ASODN对实验性小鼠结肠炎症有治疗作用,有望成为治疗炎症性肠病新药物。