【摘 要】
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第一部分:人类TRAIL真核表达载体的构建与鉴定.目的:构建并鉴定人类肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因的真核表达载体.方法:从HL-60、Jurkat细胞提取mRNA,采用RT-PCR
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第一部分:人类TRAIL真核表达载体的构建与鉴定.目的:构建并鉴定人类肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因的真核表达载体.方法:从HL-60、Jurkat细胞提取mRNA,采用RT-PCR技术合成人类TRAIL结构基因序列,利用基因工程技术将该基因片段与质粒pLXIN相连接构成重组质粒,低温氯化钙法将重组质粒转化进入大肠杆菌获得转化菌株,从转化菌株提取质粒进行酶切鉴定并序列分析.结果:RT-PCR获得了与预期产物大小一致的DNA片段,从大肠杆菌转化菌株提取得到质粒,经限制性内切酶酶切鉴定与预期结果相符,DNA测序结果与文献报道一致.结论:成功构建了TRAIL真核表达载体,含有完整的人类TRAIL基因序列.第二部分:人TRAIL真核表达载体对前列腺癌细胞PC-3M凋亡诱导作用.目的:观察TRAIL真核表达载体对前列腺癌细胞的凋亡诱导作用.方法:借助脂质体将重组质粒转染进入前列腺癌细胞PC-3M,采用Annexin-V荧光染色观察细胞凋亡的发生,MTT法检测PC-3M细胞的存活率.结果:转染后36h荧光染色可以观察到早期凋亡现象的发生,MTT法测得细胞存活率与重组质粒的浓度及转染后时间长度之间呈负相关关系.结论:重组质粒可以诱导前列腺癌细胞PC-3M出现典型的凋亡,并呈现一定的时间-剂量-效果关系,可以用于进一步的抗肿瘤研究.
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