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研究背景:慢性病毒性肝炎及其他各种刺激因子引起的慢性炎症反应所致的肝纤维化是发展为肝硬化的必经的共同途径。逆转肝纤维化或延缓肝纤维化进展,已成预防及治疗肝硬化的重要切入点。肝纤维化的的发生的关键是肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化增殖、大量分泌细胞外基质(extracellular matrix,ECM),因此对已活化HSC的逆转或促进其凋亡就成为了治疗肝纤维化的关键。内质网应激能够诱导HSC的凋亡发生,也影响HSC的自噬,但HSC凋亡的发生与自噬关系尚不明确。本实验旨在以内质网非折叠蛋白eIF2α过表达并激活HSC内质网应激为基础,研究eIF2α在肝星状细胞胶原生成的作用及机制研究,以期为逆转肝纤维化提供新思路。方法:实验对象为人源永生化的肝星状细胞(HSC-LX2细胞株),采用质粒转染使HSC过表达eIF2α,并使用TGFβ1促进HSC活化和I型胶原表达。根据实验干预条件,分为质粒空载组(Vehicle组)、转化生长因子-β1干预组(TGFβ1组)、转化生长因子-β1+过表达eIF2α转染组(eIF2αplasmid组)。免疫蛋白印迹法(Western Blot)分析各组间HSC活化蛋白α-SMA、I型胶原蛋白(COL1A2),自噬相关蛋白LC3Ⅱ、P62,内质网应激未折叠蛋白eIF2α、eIF2α磷酸化后的功能蛋白(p-eIF2α),促凋亡蛋白CHOP、抗凋亡蛋白BCL-2的表达差异;qRT-PCR检测eIF2α质粒转染效率,荧光显微镜观察LC3自噬小体,流式分析HSC各组细胞凋亡情况。结果:Western Blot 结果显示:TGFβ1 组 HSC 的α-SMA 和 COL1A2 蛋白较Vehicle组明显升高,在eIF2α plasmid组α-SMA和COL1A2蛋白表达水平较TGFβ1组下降;TGFβ1组的自噬相关蛋白P62、LC3Ⅱ较Vehicle组分别降低和升高,而在eIF2α plasmid组P62、LC3Ⅱ较TGFβ1组分别升高和降低,进一步说明在eIF2α plasmid组HSC自噬水平受到抑制;TGFβ1组较Vehicle组信号通路介导蛋白eIF2α磷酸化后的功能蛋白(p-eIF2α)降低,促凋亡蛋白CHOP降低、抗凋亡蛋白Bcl-2升高,eIF2αplasmid组较TGFβ1组比较,信号通路介导蛋白eIF2α磷酸化后的功能蛋白(p-eIF2α)升高,促凋亡蛋白CHOP升高、抗凋亡蛋白Bcl-2降低。进一步分析eIF2α蛋白表达与COL1A2蛋白表达负相关,与LC3Ⅱ表达负相关。qRT-PCR检测eIF2α质粒转染较空载组eIF2αmRNA明显升高,荧光显微镜下可见TGFβ1组自噬小体较Control组增加。流式检测结果显示,eIF2α plasmid组细胞凋亡率较TGFβ1组明显升高。结论:在HSC中过表达eIF2α可以引发自噬抑制和促进细胞凋亡,从而减少这些细胞中的胶原蛋白产生,这可能为抗肝纤维化提供了潜在的治疗策略。