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目的：在我国肝癌是常见恶性肿瘤之一，死亡率一直居高不下，肿瘤的快速生长和早期易侵袭转移是造成其术后易复发，预后差的主要原因。肿瘤细胞侵袭转移是一个包括了多个步骤的复杂过程，其中肿瘤细胞在脱离原发灶进入脉管系统以后会因为失去细胞与细胞间联系，或细胞外基质的支持而发生失巢凋亡，而少数具有抗失巢凋亡能力的肿瘤细胞能够在游离状态下生存，是肿瘤转移的重要先决条件。目前关于肿瘤细胞抵抗失巢凋亡的分子机制仍不甚明确，这提示我们或许可以通过抑制肿瘤细胞失巢凋亡抵抗，阻止或减少肿瘤的转移。本研究拟探讨AEG-1通过激活磷脂酰肌醇(-3)激酶（phosphatidyl inositol (-3) kinase，PI3K）信号通路促进肝癌细胞体外模拟失巢凋亡抵抗并观察自噬在AEG-1促进失巢凋亡抵抗过程中的作用。方法：我们收集了36对肝癌组织及相应癌旁组织标本，用实时定量PCR及Western blot检测了肝癌及相应癌旁组织、4株不同转移潜能肝癌细胞株中AEG-1的表达差异，以观察AEG-1与肝癌转移相关临床病理特征的关系；构建含AEG-1编码序列的真核表达载体，转染肝癌细胞株SMMC-7721，获得稳定过表达AEG-1的肝癌细胞株；构建靶向AEG-1的小分子RNA干扰载体，转染肝癌细胞株HCC-LM3，获得稳定沉默AEG-1表达的肝癌细胞株；流式细胞术检测AEG-1对细胞周期的调控；平板克隆形成实验和软琼脂集落形成实验检测AEG-1对肝癌细胞克隆形成能力的影响；流式细胞术检测AEG-1对体外正常培养的肝癌细胞凋亡的调控；体外失巢模型处理过表达/沉默AEG-1的肝癌细胞后，流式细胞术检测细胞失巢凋亡率改变；Western blot检测凋亡蛋白Caspase-3的活化情况，证实凋亡发生；Western blot检测AEG-1对肝癌细胞中细胞外调节信号激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)-1/2，PI3K/Akt通路关键蛋白磷酸化水平的调控；采用ERK1/2抑制剂U0126及PI3K/Akt抑制剂LY294002处理失巢培养的过表达AEG-1的肝癌细胞，流式细胞术检测细胞失巢凋亡率改变；Western blot检测PI3K/Akt下游基因Bcl-2、Bad表达变化；Western blot检测失巢培养的肝癌细胞自噬相关蛋白LC3I/II的表达；采用Atg5siRNA转染抑制细胞自噬水平后，流式细胞术检测AEG-1对细胞失巢凋亡的影响。结果：在36对肝癌及相应的癌旁组织中，有23对（63.9%）标本的癌组织中AEG-1的表达水平明显高于对应的癌旁组织（≥2倍），AEG-1的表达与肿瘤大小（≥5cm90.9%vs <5cm50%，p<0.05），分化程度（中低分化89.5%vs高分化58.8%，p<0.05），门脉转移（有94.4%vs无55.5%，p<0.05）和淋巴结转移（有90%vs无56.3%，p<0.05）密切相关。AEG-1在高转移潜能肝癌细胞株HCC-LM3、MHCC-97H中表达高于中、低转移潜能HepG2、SMMC-7721肝癌细胞株。选择相对低表达AEG-1的SMMC-7721细胞株成功构建稳定过表达AEG-1的细胞株；选择相对高表达AEG-1的HCC-LM3细胞株获得稳定沉默AEG-1的细胞株。增强SMMC-7721细胞中AEG-1表达后，细胞周期、细胞增殖、平板克隆形成、细胞凋亡率无明显改变（p>0.05），但细胞软琼脂集落形成能力增强（100%±22%vs183%±34%，p<0.05）。抑制肝癌细胞HCC-LM3中AEG-1表达后，细胞增殖能力明显下降（100%±14%vs64%±12%，p<0.05）；细胞周期明显阻滞，G0/G1期细胞增加，S期细胞减少（S期细胞比例41%±3.6%vs20%±2.9%，p<0.05）；细胞平板克隆形成能力（100%±18%vs52%±19%，p<0.05）及软琼脂集落形成能力明显降低（100%±21%vs56±15%，p<0.05）；细胞凋亡率明显增加（5.65%±0.88%vs9.87%±1.61%，p<0.05）。过表达AEG-1的肝癌细胞SMMC-7721失巢培养后凋亡率明显低于对照空载体组（34.1%±3.3%vs19%±2.1%，p<0.05）；活化的Caspase-3表达明显低于对照空载体组；沉默AEG-1的肝癌细胞HCC-LM3失巢培养后凋亡率明显高于对照空载体组（12.9%±1.6%vs21.3%±1.9%，p<0.05）；活化的Caspase-3表达显著高于对照空载体组。过表达/沉默AEG-1的肝癌细胞中ERK1/2通路关键蛋白p-ERK1/2表达增加/降低，PI3K/Akt通路关键蛋白p-Akt表达亦增加/降低；Bcl-2蛋白水平及磷酸化的Bad蛋白水平也相应增加/减少；ERK1/2通路抑制剂U0126处理失巢培养的过表达AEG-1的肝癌细胞后，细胞失巢凋亡率差异无统计学意义（14.24%±2.67%vs15.18%±2.06%，p>0.05）；而PI3K/Akt通路抑制剂LY294002处理后，细胞的失巢凋亡率明显升高（14.24%±2.67%vs23.48%±2.89%，p<0.05）；LY294002也能抑制AEG-1诱导的Bcl-2的表达以及Bad的磷酸化水平。失巢培养的肝癌细胞自噬相关蛋白LC3I型向II型转变；过表达AEG-1的肝癌细胞失巢培养后LC3蛋白II型增加，I型减少；Atg5siRNA转染使过表达AEG-1的肝癌细胞失巢凋亡率增加（16.10%±2.02%vs24.27%±2.69%，p<0.05）。结论: AEG-1通过激活PI3K/Akt信号通路上调Bcl-2表达水平和Bad磷酸化水平，增强肝癌细胞的抗失巢凋亡能力，进而参与肝癌转移；而自噬水平上调也可能参与AEG-1对失巢凋亡抵抗的促进作用。