背景阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)俗称为老年痴呆,在临床上是一种隐匿起病且呈进行性加重发展的中枢神经系统的退行性改变疾病,目前已有一些假说试图论证其内在发病机制,但其具体发病原因至今仍不明确。该疾病临床表现主要是患者出现学习记忆功能障碍、失认、失用、以及视空间技能损害等,多发生于老年人,女性患者较于男性多出约2倍,考虑女性绝经期后体内雌激素下降为主要影响因素之一。目前临床上阿尔茨海默病仍然没有较为理想的治疗药物和治疗方式方法,只能试图延缓病程进展。雌激素替代疗法(estrogen replacement treatment,ERT)以往作为可以防治更年期后女性老年痴呆(AD)的一种重要方法之一,能够切实有效延缓部分老年性痴呆疾病的发生发展,并有效降低人群发病的危险性,但由于该疗法存在一定的明显副作用,例如使用过程中会增加患者患子宫内膜癌、乳腺癌等疾病的风险,使该疗法相应的临床应用受到了很大的制约。近期研究当中有部分研究人员发现:道植物雌激素对神经中枢系统学习记忆有功能有一定影响,主要是由于植物雌激素当中含有部分弱雌激素活性的杂环多酚类化合物,但具体作用机制尚未完全阐明,有待探讨。目的本课题通过对成年SD雌性大鼠的去卵巢手术完成雌激素减退为主要影响因素造成的衰老、学习记忆障碍模型的造模,并以植物雌激素作为治疗组与雌激素药物治疗组、假手术组、单纯去势组进行组间对比,通过Y迷宫检测法测试分析各组术后的雌性大鼠空间学习记忆能力在不同药物作用下的相应改变、观测去卵巢对大鼠学习记忆能力的影响、检测植物雌激素的疗效,并探讨该药物的基本作用机制。利用免疫组织化学观测法和免疫印迹实验检测大鼠海马区双皮质素(Doublecortin,DCX)的具体表达变化,进一步阐释植物雌激素在机体自身雌激素下降过程中引起的学习记忆能力变化的具体机制,以期对植物雌激素的广泛应用以及相关疾病的治疗、预防、相关药物研发提供相应的理论基础。方法1.动物模型建立:48只健康雌性SD大鼠,约6-8周龄,体重:220g-260g,使用随机数表法随机分为4组,每组12只。第一组假手术组(sham组)、第二组单纯去势对照组(OVX组)、第三组金雀异黄酮药物治疗组(Gs组)、第四组苯甲酸雌二醇药物治疗组(EB组)。对不同分组动物给予相应的手术处理以及药物替代治疗。2.大鼠一般生理指标监测:密切观察并记录各组大鼠的一般生理状况,药物替代治疗期间各组大鼠体重是否发生变化以及动物饲料消耗情况、平均每日饮水量的变化。3.学习记忆能力检测:药物替代治疗完成后,使用Y迷宫检测法对各组SD大鼠进行空间学习记忆能力进行检测。4.大鼠海马区组织冰冻切片DCX表达情况:通过免疫组织化学法观测各组大鼠海马区内DCX的表达情况,并对免疫组织化学染色结果进行图像处理和数据分析。5.大鼠海马区内DCX含量的表达检测:利用蛋白质印迹(Western Blot)方法检测各组大鼠海马区内DCX的具体表达含量是否有差别。不同组间进行统计学分析比较。6.统计学处理:应用统计学软件SPSS17.0进行数据处理和分析。汇总的数据采用单因素方差分析法分析,如果差异性显著则可以再用LSD法进行各组间两两比较。检验水准为ɑ<0.05,若P<0.05,即可认为结果具有统计学意义。结果1.Y迷宫检测结果可见植物雌激素药物治疗组(Gs组)大鼠空间学习记忆能力与假手术组(sham组)、雌激素药物治疗的苯甲酸雌二醇组(EB组)无明显差别,与单纯去势对照组(OVX组)对比可发现,OVX组大鼠的错误反应次数明显提升,且具有统计学差异。2.DCX免疫组化结果显示:植物雌激素药物治疗组(Gs组)海马齿状回区域DCX免疫阳性细胞数量与假手术组(sham组)、雌激素药物治疗的苯甲酸雌二醇组(EB组)无明显差别,单纯去势对照组(OVX组)DCX免疫阳性细胞数量与另外三组比较呈明显减少态势,差别有统计学意义。3.各组之间SD大鼠海马组织当中DCX的Western Blot检测结果:DCX在各组大鼠海马组织检测结果当中均有阳性表达,与sham组、EB组相比,Gs组较二者表达量差异不明显;OVX组与sham组、EB组相比较,OVX组表达量下降明显,差异性显著(P<0.05)。结论1.去卵巢后大鼠空间学习记忆功能明显受损,证实雌激素对学习记忆能力有至关重要的意义。2.不同组别大鼠海马区DCX表达有差异,主要考虑是由于不同组别的大鼠海马神经元的再生水平有一定差异。3.植物雌激素对去卵巢大鼠学习记忆功能尤其是空间学习记忆能力有明显改善效果,其主要作用机制可能与该药物促进了大鼠的海马齿状回区域的神经元再生及迁移有关。