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目的:比较不同条件下,PRMT2及其新的剪接体PRMT2α、PRMT2β、PRMT2γ对ERα转录活性的影响;检测PRMT2及PRMT2α、PRMT2β、PRMT2γ与ERa在细胞外的相互作用。方法:提取pcDNA3.0-PRMT2、pcDNA3.0-PRMT2α、pcDNA3.0 -PRMT2β、pcDNA 3.0-PRMT2γ及pcDNA3.0空载体质粒,分别与pcDNA3.0-ERα瞬时共转染(采用脂质体介导法)293T细胞,建立萤火虫荧光素酶双报告基因检测系统,选用含受雌激素反应元件(ERE, estrogen response elements)一致序列调控的荧光素酶基因(ERE-Luc)作为报告基因,通过荧光测定仪检测ERE-luc荧光素酶基因活性值,进而观察PRMT2及其剪接体对ERα转录活性的影响。该部分包括两个内容,其一观察在有无雌激素条件下, PRMT2及PRMT2α、PRMT2β、PRMT2γ质粒分别对ERα转录活性的影响。其二是观察雌激素抑制剂4-羟基他莫西芬(4-OHT)、氟维司群(ICI182,780)条件下,PRMT2及其各剪接体PRMT2α、PRMT2β、PRMT2γ对ERα转录活性的影响。将表达融合蛋白GST-PRMT2及其剪接体的重组质粒和表达GST的空载体pGEX-5T转化到大肠杆菌BL21中,诱导融合蛋白的表达,将获得的蛋白样本进行SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝染色法验证蛋白表达水平。GST-Sepharose 4B亲和层析法纯化GST- PRMT2α、GST-PRMT2β、GST- PRMT2γ融合蛋白及GST蛋白,将pcDNA3.0-ERα瞬时转染293T细胞,收集细胞裂解液,运用GST pull-down技术检测PRMT2及其各剪接体PRMT2α、PRMT2β、PRMT2γ与ERα在细胞外相互作用情况,及其与雌激素的相关性。结果:1.通过双荧光素酶报告基因检测系统检测发现,在雌激素不存在时,PRMT2及其剪接体对ERα转录活性无明显提高。在雌激素存在时,与空载体相比,PRMT2及其剪接体PRMT2α、PRMT2β、PRMT2r分别使ERα的转录活性提高了约2.9倍、1.7倍、1.5倍及2.1倍。2.分别加入雌激素及雌激素抑制剂(ICI182,780,4-OHT)条件下,雌激素抑制剂可降低PRMT2及其剪接体PRMT2α、PRMT2β、PRMT2γ对ERα转录活性的影响。3.通过GST pull-down技术检测发现,无论雌激素是否存在, GST蛋白与ERα不能结合,而GST- PRMT2α、GST- PRMT2β、GST- PRMT2γ融合蛋白均能分别与ERα结合。结论:PRMT2α、PRMT2β、PRMT2γ与PRMT2一样能以雌激素依赖的形式提高ERα转录活性,雌激素抑制剂能降低PRMT2α、PRMT2β、PRMT2γ对ERα转录活性的影响。PRMT2及其各剪接体PRMT2α、PRMT2β、PRMT2γ在细胞外均能以不依赖于雌激素形式与ERα相结合,雌激素对其可能有增强效应。PRMT2及其各剪接体可能与PRMT2一样是ERα的共激活子,也可能通过ERα信号途径影响乳腺癌的发生发展,有望成为乳腺癌治疗的新靶标。