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[目的]：构建人白细胞介素12 （Human interleukin-12, hIL-12） 5型腺病毒载体（AdhIL-12）,感染人骨髓间充质干细胞（Human bone-marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs）,检测IL-12的表达,为IL-12临床应用方式的改进奠定基础。[方法]：实验于2009-05／2009-09在解放军北京军区总医院生物治疗中心实验室完成。人树突状细胞（Dendritic cells, DCs）经细菌脂多糖（LPS）处理24 h后提取DCs总RNA,用RT-PCR方法获得hIL-12 p35和p40基因cDNA,分别克隆至真核表达载体pcDNA3.1（-）和pmRNA IRES中；然后再亚克隆至腺病毒载体穿梭质粒pDC515,p35和p40 cDNA通过脑心肌炎病毒内部核酸进入位点（Internal ribosomal entry sites, IRES）连接,构建pDC515 hIL-12 p35/IRES/p40腺病毒穿梭质粒。采用Ad MaxTM腺病毒载体体系,pDC515hIL-12 p35/IRES/p40穿梭质粒与pBHGfrtΔE1,3FLP骨架质粒共转染至293细胞,通过重组酶位点特异性重组获得Ad hIL-12。常规培养hBMSCs,第三代hBMSCs按每孔5×105细胞接种至12孔板中,Ad hIL-12按每个细胞100 pfu的感染复数（MOI）感染hBMSCs2 h后经lO Gyγ射线照射使hBMSCs失去增殖能力,每24h更换一次培养液,收集1-5天的细胞培养上清,用hIL-12p70 ELISA试剂盒检测细胞上清中hIL-12的含量。[结果]：经测序证实,RT-PCR所获得的hIL-12 p35和p40基因cDNA序列与GenBankNM000882（762 bp）和NM002187（987 bp）提供的序列完全一致。pDC515 hIL-12p35/IRES/p40穿梭质粒与pBHGfrt△E1,3FLP骨架质粒共转染至293细胞约10天左右细胞开始有空斑（plagues）形成,挑取明显的空斑接种至293细胞,经过2-3轮扩增后,收集293细胞冻溶裂解,提取DNA进行PCR鉴定,分别获得hIL-12 p40和p35 PCR片段,证实冻溶裂解物中含有hIL-12 p40和p35基因DNA片段。纯化的病毒按100 pfu／细胞的MOIs感染hBMSCs, ELISA检测12 h即有IL-12的分泌,至24-48 h表达量到达高峰,并持续表达至第五天表达水平仍无下降趋势,hBMSCs在12 h、24 h、48 h、72 h、96 h和120 h hIL-12表达量分别为（4.91±1.09）、（59.40±1.17）、（106.88±4.64）、（144.53±6.10）、（182.72±12.14）和（205.83±10.26）ng/106细胞／24 h。[结论]：用Ad MaxTM腺病毒载体体系可高效、快捷地获得所要包装的腺病毒载体,通过IRES连接hIL-12的两个亚基p40和p35可有效地表达IL-12p70蛋白；Ad hIL-12腺病毒载体感染hBMSCs后可持续高水平分泌hIL-12,在以hBMSCs为载体细胞的基因治疗中有潜在的应用前景。