论文部分内容阅读
第一部分:CAPE通过p38 MAPK/NF-κB通路抑制小胶质细胞活化缓解神经病理性疼痛目的:观察咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)对慢性坐骨神经缩窄性损伤(chronic constrictive injury,CCI)小鼠脊髓小胶质细胞中p38MAPK/NF-κB信号转导通路、细胞活化和下游炎症因子的影响,研究CAPE缓解神经病理性疼痛的可能作用机制,为临床的合理应用提供依据。方法:选取雄性CD-1小鼠,6-8周龄,体重18-22g,采用CCI方法制备小鼠神经病理性疼痛模型,通过疼痛行为学评估指标—小鼠机械性缩足反射阈值,观察CAPE对小鼠神经病理性疼痛行为学的影响;采用免疫印迹和免疫荧光法检测CAPE对脊髓小胶质细胞活化程度的影响;采用免疫印迹法检测CAPE对脊髓小胶质细胞中p38 MAPK及NF-κB p65的影响;采用RT-PCR技术检测CAPE对小胶质细胞内促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)mRNA表达的影响。结果:CCI可诱导小鼠机械性缩足反射阈值的下降,上调脊髓中p38 MAPK和NF-κB p65磷酸化水平,活化脊髓中小胶质细胞,增加促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)mRNA的表达。CAPE可以缓解CCI小鼠机械性痛觉敏化,抑制CCI小鼠脊髓小胶质细胞的活化。同时,CAPE抑制脊髓小胶质细胞中p38 MAPK和NF-κB p65磷酸化,降低促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)mRNA的表达。结论:CAPE通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号转导通路,抑制脊髓小胶质细胞的活化,降低促炎性细胞因子的表达,缓解神经病理性疼痛。CAPE有可能成为治疗神经病理性疼痛的潜在药物。第二部分:CAPE通过p38 MAPK/NF-κB通路抑制LPS诱导的小胶质细胞炎性反应目的:观察CAPE对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞系BV-2细胞中p38 MAPK/NF-κB信号转导通路、细胞活化和下游炎症因子的影响,研究CAPE抑制小胶质细胞炎性反应的作用机制,为临床的合理应用提供依据。方法:选用体外培养的小胶质细胞系BV-2细胞,采用免疫印迹和免疫荧光法检测CAPE对LPS诱导的BV-2细胞中p38 MAPK及NF-κB p65的影响;采用RT-PCR技术检测CAPE对体外培养的BV-2细胞中促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)m RNA表达的影响。结果:在体外培养的小胶质细胞中,LPS诱导后上调BV-2细胞中p38 MAPK磷酸化水平,促使BV-2细胞中NF-κB p65从细胞质向细胞核转运,增加促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)m RNA的表达。CAPE能够抑制LPS诱导的BV-2细胞中p38 MAPK的磷酸化及NF-κB p65的核转位,以及促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)m RNA的表达上调。结论:CAPE通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号转导通路,抑制BV-2细胞的活化,下调促炎性细胞因子的表达,减轻小胶质细胞的炎性反应。