缺锌胁迫介导玉米叶片细胞凋亡

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaoex11
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植物缺锌时,表现为叶片脉间失绿,枯萎黄化,局部细胞死亡。动物学上研究业已表明缺锌会诱导细胞凋亡,但缺锌是否会导致植物出现细胞凋亡特征,还缺少深入研究。本文选择两个玉米品种郑单958和农大108为试验材料,进行营养液培养,设置缺锌(0μmol/L)和正常供锌(1μmol/L)处理,研究缺锌胁迫下玉米幼苗生长和锌吸收;利用傅立叶变换红外光谱(FTIR)技术研究植株不同器官组分变化;利用光学显微镜和电子显微镜观察叶片细胞结构;通过透射电镜-X射线能谱(TEM-EDS)测定叶片细胞中锌含量分布;利用琼脂糖凝胶电泳进行叶片DNA梯状条带分析,利用DAPI荧光染色研究叶片细胞DNA降解特征,检测类Caspase-3酶活性,以期阐明缺锌胁迫玉米叶片细胞形态与生理变化特征。得到如下主要结论:(1)缺锌胁迫下,植株地上部锌含量明显下降,低于临界水平(20g/g),生物量降低;缺锌根系面积与体积变小,侧根数量和长度减少,直径≤0.3mm细根在总根长中的比例降低,总根长变短。用缺锌/施锌植株生物量比来表征玉米对缺锌敏感性,品种农大108较郑单958对缺锌更为敏感。FTIR研究发现:缺锌条件下根系和叶片FTIR谱在波数3410、2920、1650、1380、1055cm-1附近处透过率较高,茎FTIR谱在这些波数处透过率较低,表明缺锌导致根系和叶片中碳水化合物、脂类、蛋白质及核酸含量下降,而在茎中有所积累。农大108各组分变化受缺锌影响较大。(2)TEM-EDS检测结果表明:锌在叶绿体和细胞核中分布较多,在细胞质中分布较少。缺锌时,叶片细胞细胞质中锌分布极低,施锌增加了细胞核和叶绿体中的锌分配。缺锌胁迫下,郑单958维管束鞘细胞叶绿体、细胞质中锌分布高于农大108,而正常供锌条件下,农大108叶肉细胞各部位锌分布比例大于郑单958,农大108叶片细胞中锌含量分布受缺锌影响较大。(3)光学显微镜下观察发现缺锌玉米叶肉细胞体积变小、收缩,叶绿体数量减少。电子显微镜下观察发现缺锌维管束鞘细胞叶绿体中淀粉粒积累;叶肉细胞核膜出现皱缩,核内染色质凝集固缩,趋向核膜边缘,向外周聚集,形成周边化;维管束鞘细胞细胞核结构变形、萎缩,呈不规则状。(4)利用琼脂糖凝胶电泳发现:缺锌处理15天,叶片中DNA出现降解,电泳呈现拖尾(DNA ladder)。通过DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚)染色,荧光显微镜下观察发现缺锌时,可见叶片细胞的细胞核变形、弥散,碎片增多。缺锌培养20天后,农大108叶片Caspase3酶活性显著升高,而郑单958叶片中Caspase酶活性在锌处理间差异不明显。缺锌胁迫下叶片细胞的细胞核、细胞质和叶绿体中锌分布明显减少,细胞体积变小,收缩;细胞核变形,破碎,核内染色质凝集固缩、弥散,向外周聚集。DNA出现降解,出现DNAladder现象,Caspase3酶活性有所上升。初步结论认为,缺锌胁迫下,玉米叶片细胞出现细胞凋亡。
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