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目的:通过微量液基稀释法、血清芽管实验、XTT(甲基四氮盐)减低法等实验方法研究黄藤素在体外对白色念珠菌生物膜的抑制作用,为寻找抑制白色念珠菌生物膜相关性感染的有效成分提供新的基础研究。 方法: 1.用XTT减低法从临床分离的痰、咽拭子、耳拭子、生殖道分泌物、伤口分泌物标本中筛选能形成生物膜的白色念珠菌菌株。 2.采用CLSI推荐的M27-A方案,用微量液基稀释法测定黄藤素对白色念珠菌的MIC值。 3.进行芽管抑制实验,观察不同浓度的黄藤素作用于白色念珠菌后对白色念珠菌芽管形态的影响并进行计数,测定不同浓度的黄藤素对白色念珠菌芽管的抑制率。 4.用XTT减低法测定不同浓度黄藤素对不同生长阶段的白色念珠菌生物膜的抑制作用。 5.采用AO/EB染色法观察黄藤素对白色念珠菌生物膜内白色念珠菌形态的影响。 结果: 1.临床收集分离的50株白色念珠菌中,共有18株可以形成生物膜,其中痰液中分离出来的可以形成生物膜的菌株数量较多。 2.黄藤素对白色念珠菌的最小抑菌浓度为312.5μg/ml。 3.血清芽管试验结果显示,大于2500μg/ml的黄藤素对白色念珠菌出芽的抑制率可达100%,但转种至SDA上仍有菌落生长。另外即使625μg/ml的黄藤素对白色念珠菌出芽的抑制率依然可以达到90%以上。并且镜下可见与阴性对照组相比黄藤素作用后白色念珠菌不出芽、芽管长度有限、不能形成多层面结构等多种形态改变。 4.5000μg/ml、2500μg/ml的黄藤素对2h的生物膜的抑制率为95.6±0.54%、90.8±0.32%,对4h生物膜的抑制率为91.3±0.37%、83.6±1.21%,对12h、24h的生物膜的抑制率逐渐降低。 5.黄藤素作用后可见生物膜内死菌比例与黄藤素浓度有关。当黄藤素浓度为5000μg/ml时镜下可见大量死菌。在低浓度时可见活细胞量多并伴有少量酵母细胞出芽。 结论: 1.五种类型的临床分离标本中共有18株可以形成生物膜,痰液标本中分离产生物膜的白色念珠菌比例最大。 2.黄藤素对白色念珠菌的最小抑菌浓度为312.5μg/ml。 3.大于2500μg/ml的黄藤素对白色念珠菌酵母细胞的出芽的抑制率为100%。镜下可见黄藤素能够抑制白色念珠菌酵母细胞芽管的生成,并且影响其菌丝的形态。 4.黄藤素对白色念珠菌生物膜的抑制作用随黄藤素浓度的升高而增加,同一浓度的黄藤素对不同生长阶段白色念珠菌生物膜的抑制作用随着生物膜的成熟而减弱。 5.黄藤素作用后可见白色念珠菌生物膜内死菌比例随黄藤素浓度的增高而增加。说明黄藤素可以有效的对白色念珠菌生物膜进行抑制。