糖型有机聚合物整体柱的制备与应用研究

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糖类化合物是自然界中存在最多、分布最广的具有独特化学结构和生物功能的化合物,不仅仅是构成生物体的组成成分之一,同时也是生物活动不可或缺的一部分,发挥着多种重要的生物功能,如细胞间识别与调控、免疫系统的应答与调控等。由于其独特的多羟基空间结构,糖类化合物被广泛应用于色谱中,在分离极性化合物、生物大分子以及研究糖介导的相互作用等领域具有重要意义。然而,目前大部分的糖型固定相都是基于硅胶基质材料,存在着制备复杂、pH适用范围窄、种类单一等缺点,难以满足生物大分子的分离分析要求。有机聚合物整体柱是由单体、交联剂、致孔剂和引发剂组成的混合溶液通过原位聚合而成的连续床固定相。得益于独特的孔径通道网络,有机整体柱表现出优异的色谱性能、生物相容性等优点,适用于生物大分子的分离。本论文通过制备新型单糖、二糖有机聚合物整体柱,实现样品的简单、快速分离,并应用于生物样品与药物分离领域。第一章简述糖类化合物的定义、结构特点以及色谱方面的应用,总结目前糖型固定相的种类、特点与不足,提出开发新型糖型固定相的迫切性。介绍新型色谱固定相基质-整体柱,描述其种类以及相应的优缺点,提出糖型有机聚合物整体柱的制备意义,最后简述糖类化合物的固定化的方法。第二章结合点击化学反应,设计了单取代的糖类化合物聚合功能单体的合成路径,能适用于大部分链状糖类化合物的结构修饰,并成功地合成了单糖、二糖类聚合功能单体:PMA-Glucose与PMA-Maltose,采用IR,MS,1H-NMR,13C-NMR等手段验证结构。第三章以PMA-Glucose为功能单体,制备新型的单糖类整体柱:poly(PMA-Glucose-co-MBA)。优化制备条件(调节单体、交联剂、生孔剂之间的比值),以获得色谱性能最佳的整体柱,并对其理化性质进行考察。保留机理结果表明,当流动相乙腈含量大于60%时表现出强的亲水的作用,并对强极性化合物具有良好的分离效果,采用等度洗脱的方式,成功地对不同亲水标准样品,包括核苷系列样品、苯酚系列样品、苯甲酸系列样品,分别实现了基线分离,具有良好的应用价值。第四章以PMA-Maltose为功能单体,制备新型的二糖类整体柱poly(PMA-Maltose-co-MBA),通过一系列的优化得到色谱性能良好的色谱柱,并利用IR、SEM等手段考察整体柱的理化性质和形貌学;与poly(PMA-Glucose-co-MBA)整体柱类似,当流动相乙腈含量大于60%时,poly(PMA-Maltose-co-MBA)表现出亲水作用,对核苷类、苯酚类、苯甲酸类样品分离效果均优于单糖整体柱,尤其是苯甲酸类样品。第五章以IgG为富集对象,考察poly(PMA-Glucose-co-MBA)整体柱与poly(PMA-Maltose-co-MBA)整体柱糖肽富集能力。对Eluting Buffer中乙腈含量与TFA浓度进行优化后,poly(PMA-Glucose-co-MBA)整体柱与poly(PMA-Maltose-co-MBA)整体柱成功地从IgG酶解液中富集了31条与18条糖基化肽。第六章总结与展望。
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