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炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)为累及整个消化道及多个脏器系统的慢性复发性炎症性疾病,主要包括克罗恩病(Crohn’s disease,CD)和溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)。其病程长,病情反复,无诊断金标准及有效的根治手段,近年在我国发病率明显上升,危害国民健康。病理特点主要为慢性复发性的肠道炎症及上皮损伤,活动期肠道组织中可出现大量淋巴细胞浸润。血管生成素样蛋白4(angiopoietin-like protein 4,ANGPTL4)为一种多功能信号蛋白,主要参与调节糖脂代谢、血管的生成和渗漏、肿瘤的生长、转移等。近年其在炎症调节方面的作用受到热议。IBD属于免疫性疾病,炎症的发生、发展是其发病的关键环节。既往研究发现ANGPTL4可参与调节肠道炎症反应。然而ANGPTL4是否可直接调节IBD发病及其中主要由哪种免疫细胞介导期待进一步研究。目的:1.分析IBD患者和实验性肠炎小鼠肠道ANGPTL4的表达、血浆ANGPTL4的浓度变化及分别与CD8+T细胞、巨噬细胞(MΦ)浸润及其活性的关联;2.观察ANGPTL4基因敲除(ANGPTL4-/-)小鼠对于实验性肠炎的敏感性及CD8+T/MΦ的变化;3.分析ANGPTL4重组蛋白对实验性肠炎及CD8+T/MΦ的直接影响。方法:1.利用酶联免疫吸附实验(ELSIA)测定血浆ANGPTL4浓度,血清TG浓度;分离IBD患者和健康个体外周血单个核细胞(PBMCs),流式细胞术(FCM)分别检测CD3+CD8+CXCR3+、CD8+IFN-γ+、CD14+CD86+细胞的频率;免疫组织化学技术(IHC)观察ANGPTL4在肠道病变组织的表达和和CD8+T/MΦ的浸润;Western blot(WB)检测肠道病灶及病灶旁组织ANGPTL4的表达;用Spearman分析ANGPTL4与IBD疾病程度及CD8+T/MΦ的相关性。2.利用右旋葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate sodium salt,DSS)诱导不同天数组实验性小鼠肠炎,ELIS A法检测血清ANGPTL4浓度;FCM分别检测各组肠道CD8+T/MΦ频率;IHC和WB观察及检测肠道ANGPTL4的表达。3.DSS诱导ANGPTL4-/-及野生型(WT)小鼠实验性肠炎;记录并绘制体重及疾病指数变化曲线;HE染色对比肠道病理变化;FCM检测肠道CD8+T/MΦ频率。4.DSS诱导小鼠肠炎同时腹腔注射ANGPTL4币组蛋白,记录并绘制体重及疾病指数曲线;FCM检测肠道CD8+T/MΦ频率;IHC观察对比CD8+T/MΦ在肠道组织的浸润。结果:1.轻/中度活动期CD、UC患者血浆的ANGPTL4浓度均高于健康对照组,其中CD组升高更显著;重度活动期ANGPTL4的浓度较轻/中度期均有所下降。CD、UC患者肠道病灶组织的ANGPTL4表达较正常组织升高;其中,CD患者,ANGPTL4的表达与疾病严重程度正相关,外周血及肠道ANGPTL4的表达与CD8+T细胞频率均成负相关;肠道ANGPTL4表达与巨噬细胞浸润正相关。UC患者,外周血及肠道ANGPTL4的表达与CD8+T细胞频率均成负相关;未发现ANGPTL的表达与疾病严重程度及外周血和肠道ANGPTL4的表达与巨噬细胞频率的相关性。2.实验性肠炎小鼠随造模天数增加血清ANGPTL4浓度及肠道ANGPTL4表达5天达高峰,7天下降与肠道CD8+T细胞频率的变化一致;肠道MΦ频率3天即明显上升维持至7天。3.ANGPTL4-/-小鼠较WT肠炎明显加剧,肠道CD8+T细胞频率显著升高,MΦ频率无差异。4.肠炎小鼠腹腔注射ANGPTL4重组蛋白后,肠炎症状减轻,肠道中CD8+T/MΦ细胞频率下调、浸润减少,其中CD8+T细胞变化更为显著。结论:ANGPTL4有望成为在CD活动期和实验性肠炎中反映疾病严重程度的一种生物学标志物;同时ANGPTL4可能通过下调CD8+T细胞炎症活性缓解IBD及实验性肠炎的发病;为IBD的临床诊治提供了新的方向。