研究目的沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,C.trachomatis）感染除导致沙眼外,也可以引起性传播疾病,导致宫颈炎、输卵管炎、盆腔炎等,最终可致流产、异位妊娠、不孕等严重后遗症。目前认为C.trachomatis感染引起的炎症反应是其致病的主要原因,但确切机制尚不明确,本课题从①C.trachomatis感染引起IL-1α、IL-6、IL-8等炎症因子产生的分子机制;②IL-1α在C.trachomatis诱导IL-8产生中的作用;以及③caspase-1在宿主抵抗衣原体感染和衣原体导致病理损伤中的作用,三个方面探索C.trachomatis感染诱导炎症的机制。为深入研究C.trachomatis致病机制和机体的抗感染免疫反应提供实验依据。研究方法1.用ELISA、RT-PCR方法检测C.trachomatis感染诱导上皮细胞中IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8等细胞因子的产生;用免疫荧光技术观察C.trachomatis感染后细胞内IL-8的表达和亚细胞定位。2.用免疫印迹法检测C.trachomatis感染后ERK、P38、JNK三条MAPK信号通路的激活,用化学抑制剂分别抑制三条通路的活化,观察各条通路在C.trachomatis诱导IL-1α、IL-6、IL-8等细胞因子中的作用。3.用IL-1αsiRNA、IL-1α^-/-鼠巨噬细胞感染实验以及对IL-1α不同表达能力的细胞系感染实验,观察IL-1α在C.trachomatis诱导IL-8中的作用。4.通过IL-1Ra和IL-1α中和性抗体阻碍IL-1RⅠ受体途径,用IL-1RⅠ^-/-鼠巨噬细胞感染实验,观察IL-1α是否通过IL-1RⅠ途径参与C.trachomatis诱导IL-8;并通过免疫荧光观察IL-1α和IL-8亚细胞定位以及真核细胞pDsRed-pro-IL-1α质粒转染实验,进一步明确IL-1α参与C.trachomatis诱导IL-8的机制。5.通过免疫印迹检测C.trachomatis和C.muridarum（小鼠生物型C.trachomatis）感染上皮细胞后caspsase-1的活化;用caspsase-1^-/-鼠生殖道感染C.muridarum,制备C.muridarum生殖道感染动物模型,监测感染鼠IFU情况,观察小鼠对C.muridarum初次感染、再次感染的易感性和C.muridarum的清除,以及初次感染、再次感染后小鼠生殖道病理改变。研究结果1.通过ELISA、RT-PCR方法检测发现C.trachomatis感染可诱导上皮细胞产生IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8等细胞因子,呈时间-剂量依赖性;并且IL-1β、IL-6、IL-8在细胞内和细胞外表达改变的情况是一致的,IL-1α则不同,C.trachomatis感染36h后观察到细胞内IL-1α升高,直至感染60h才检测到细胞外IL-1α;用免疫荧光技术观察C.trachomatis感染的细胞内IL-8表达增高,聚集在高尔基体内。2.用免疫印迹法检测到C.trachomatis感染后可以激活MAPK通路中ERK和P38通路,呈时间依赖性,与C.trachomatis感染诱导IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8等细胞因子的产生具有一定的相关性;通过化学抑制剂分别抑制MAPK三条通路,发现P38信号通路参与C.trachomatis诱导IL-1α、IL-6、IL-8,ERK信号通路仅参与C.trachomatis诱导IL-8。3.通过RT-PCR和ELISA方法发现HT29、HGF两株细胞系不表达内源性IL-1α,C.trachomatis感染也不能诱导HT29、HGF产生IL-8;SiHa、Hela229、Hep2细胞系表达内源性IL-1α,C.trachomatis感染诱导其产生IL-8;IL-1αsiRNA和IL-1α^-/-鼠巨噬细胞感染实验进一步证实C.trachomatis通过IL-1α诱导IL-8产生。4.通过IL-1Ra和IL-1α中和抗体阻碍IL-1α与IL-1RⅠ结合,发现在C.trachomatis感染48h,阻断IL-1RⅠ受体途径并不影响IL-8产生,C.trachomatis感染72h阻断IL-1RⅠ受体途径可以部分显著地抑制IL-8产生。IL-1RⅠ^-/-鼠巨噬细胞C.trachomatis感染实验,显示在C.trachomatis感染48h,IL-1RⅠ^-/-鼠巨噬细胞IL-8产生与野生对照鼠无差异。免疫荧光观察发现C.trachomatis刺激细胞内IL-1α进入细胞核,同时诱导IL-8产生;将pDsRed-pro-IL-1α质粒转染Hela229细胞发现,pDsRed-pro-IL-1α可以进入细胞核诱导IL-8产生。5.免疫印迹实验检测到C.trachomatis和C.muridarum感染后可活化caspase-1;将C.muridarum感染caspase-1^-/-鼠生殖道,制备C.muridarum生殖道感染动物模型,发现caspase-1不影响小鼠对C.muridarum的易感性,无论初次还再次感染,caspase-1^-/-鼠清除C.muridarum能力与对照组相比无显著差别。制备病理切片评估小鼠生殖道炎症程度,显示caspase-1^-/-鼠输卵管的炎症损伤在初次感染后较野生对照组显著减轻（p＜0.05）。结论1.活化MAPK/ERK通路参与C.trachomatis诱导炎症因子IL-8的产生,活化MAPK/P38通路参与C.trachomatis诱导炎症因子IL-1α、IL-6、IL-8的产生。2.细胞内IL-1α可以通过一条非IL-1RⅠ依赖途径介导C.trachomatis诱导IL-8产生。3.Caspase-1参与C.muridarum对小鼠上生殖道的病理损伤,而不影响小鼠抵抗C.muridarum感染。