研究背景和目的肾癌是泌尿系统常见恶性肿瘤之一,是起源于肾小管上皮细胞的一种常见肾脏恶性肿瘤约占成人实体恶性肿瘤的2%～3%,占肾脏原发恶性肿瘤的85%-90%。我国近年来肾癌的发病率和死亡率均有上升趋势。目前肾癌的发病原因还不是十分清楚,放化疗治疗效果不佳,虽然根治性的肾切除手术被认为是最有效果的治疗方法,然而进展期肾癌的5年生存率低于10%。肿瘤复发、转移仍是威胁患者生命的主要因素。肾癌的早期诊断较为困难,除影像学检查结果外缺乏早期的实验室诊断指标,使得早期发现早期诊断及治疗具有一定的难度。最新的研究显示肾癌的发生发展与miRNAs之间存在密切的关联,有可能为肿瘤的早期诊断、预后判断及基因治疗提供新的途径。miRNA是由18～25个核苷酸组成的单链小RNA,广泛存在于真核生物细胞中。它由DNA转录产生,但并不翻译成蛋白质,是一种非编码小分子RNA。miRNA广泛存在于真核生物在蛋白质合成中调节其他基因的功能。miRNA基因约站整个基因组的1%,miRNA通过与靶基因RNA的互补配对在转入后水平对基因表达进行调控,导致mRNA再降解和翻译抑制。miRNA与其靶mRNA分子组成了一个复杂的调控网络,参与包括细胞增殖、凋亡、细胞分化、发育、逆境应答等多种生物学过程。miR-199a是高度保守的miRNA,在肝癌、宫颈癌、前列腺癌等多种肿瘤中表达异常,并可通过调控细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力的改变而参与肿瘤的发生发展,其表达水平有可能作为多种肿瘤临床诊断、病理分型及其预后的标志。在肾细胞癌与mir-199a的发生、发展的研究鲜有报道本研究目的在于探讨mir199a在肾癌组织及细胞中的表达改变及其对肾癌临床数据的影响,以期为肾癌的发病机制研究开辟新的领域,为mir-199a在肾癌的诊断、治疗及其早期防治领域的实践和应用提供实验依据。方法：1.Trizol法提取肿瘤与癌旁组织总RNA,应用分光光度计法检测RNA浓度、纯度,琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,使用实时定量RT-PCR(染料法)技术检测67例肾透明细胞癌患者肿瘤及瘤旁正常组织mir-199a的表达,分析表达的差异与临床病理特征等多种指标之间的关系。2.对肾癌细胞系Caki-1使用LipofectamineRNAiMAX瞬时转染模拟物(mimic)和1niR-199a-5p.应用MTS检测细胞增殖,生长曲线；应用流式细胞仪检测比较转染后细胞周期分布变化、细胞凋亡变化；应用Transwell试验检测细胞迁移能力变化。统计学处理(二级标题)采用SPSS17.0对实验结果进行统计学处理,计数资料组间比较应用x2检验确切概率法,生存分析应用Kaplan-Meier法Log rank检验,多因素分析采用c0x回归,实验室数据采用的方差分析,组内两两比较采用LSD法,检验水准为a=0.05。结果：1.在67例肾细胞癌和癌旁组织中miR-199a均有不同程度的表达,通过qPCR分析显示在肾细胞癌中47例niR-199a的表达低于癌旁正常组织,均值13.7倍。miR-199a的表达与肿瘤浸润程度和肿瘤复发成负相关(χ2=4.215,P=0.040,χ2=6.357,P=0.012),而与年龄、组织学类型、淋巴结转移、远处转移、Fuhman分级等无统计学关联(χ2=0.557,P=0.312；χ2=0.230,P=0.632；χ2=1.755,P=0.185；χ2=0.171,P=0.680；χ2=0.273,P=0.202)。miR-199a下调组生存期显著低于对照组(Log-rank test x2=5.456,p=0.019)2.通过转染miR-199a1肾细胞癌株Caki-1,经qPCR检测niR-199a转染细胞与NC组和Icell组有显著差异。转染miR-199a,MTS、细胞生长、增值率显著降低,生长曲线斜率下降。流式细胞术检测1miR-199a转染细胞凋亡显著升高。G1期细胞比例升高,G2期细胞比例减少,S期细胞无显著变化。3.Transwell实验显示,转染miR-199a的Caki-1细胞细胞相对于空白组及阴性对照组,细胞穿过小室的数目显著减少。与空白组、阴性对照组相比,转染miR-199a组差别具有统计学意义(,P=0.002；P=0.001)说明Caki-1细胞转染miR-199a后细胞侵袭能力得到抑制.结论1通过本研究的检测发现niR-199a在肾癌组织中表达水平显著下调,并且miR-199a表达水平与肾癌患者原发肿瘤浸润、肿瘤复发及病人预后不良有关,提示了niR-199a可能为肾癌临床诊断及病理分级提供参考价值,可能是一种潜在的肾癌预后判断指标。2本研究通过体外细胞实验发现了在肾癌细胞中的过表达miR-199a,可导致细胞增值受到抑制,影响细胞周期G1期阻滞,增加肿瘤细胞凋亡；降低了肾癌细胞株的浸润能力。为miR-199a作为肿瘤基因治疗的靶点和抗癌药物的研究提供了重要的实验依据。研究背景和目的肾癌是常见的恶性肿瘤之一,占成人恶性肿瘤的2%-3%。肾癌的侵袭、转移是影响其预后的主要因素。近年来研究发现,Top2a基因属于拓扑异构酶家族(TOP)成员,细胞酶水平的提高可引起的染色体断裂,提高DNA发生缺失,插入,易位的水平。引起细胞转化和肿瘤形成。Top2a在多种肿瘤中高表达如乳腺癌、胃癌、结肠癌等。目前,此基因在肾癌中的相关研究未见报道。本研究通过免疫组化及RT-PCR测定肾癌组织中TOP2a蛋白及基因的表达并与临床指标的相关性进行初步探讨。方法：采用RT-PCR检测36例肾细胞癌及癌旁正常组织Top2a基因表达,用免疫组化SP法检测40例肾细胞癌,19例癌旁正常组织中Top2a蛋白的表达水平。统计学处理(二级标题)采用SPSS17.0对实验结果进行统计学处理,计量资料采用独立样本t检验,计数资料组间比较应用χ2检验及确切概率法,等级资料采用秩和检验,检验水准统一为a=0.05。结果：TOP2a在肾细胞癌和癌旁组织中均有不同程度的表达,但在肾细胞癌的表达显著高于癌旁正常组织,36例肾癌标本中,30例标本TOP2A基因表达上调(82%),肾癌组织中的Top2a比癌旁组织的表达量高5.52倍。TOP2的表达与肿瘤浸润程度成正相关(t=-5.456,P<0.001),而与年龄、性别、淋巴结转移、远处转移及复发等无统计学关联(P>0.05)。结论：0P2a的表达在肿瘤组织中显著高于正常组织,且与原发肿瘤浸润程度呈正相关,因此TOP2a基因的过表达可能促进肾的进展。