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第一部分一个Wiskott-Aldrich综合征家系遗传学及分子发病机制研究目的:探讨一个Wiskott-Aldrich综合征(Wiskott-Aldrich syndrome,WAS)患者家系发病机制与临床表型的相关性。方法:1.收集WAS家系家庭成员病史。2.采集先证者及其表弟外周血进行实验室检查。3.流式细胞术(Flow cytometry,FCM)和免疫印迹实验(Western blot,WB)检测先证者及其母亲WAS蛋白(Wiskott-Aldrich syndrome protein,WASp)表达。4.下一代测序技术(next generation sequencing,NGS)对先证者及表弟进行靶向测序,筛选致病基因,并对其父母及表弟父母进行Sanger测序验证。5.利用生物信息学软件对基因检测结果进行致病性分析。结果:1.该WAS家系中先证者及表弟均为患儿,先证者反复感染伴严重湿疹,临床评分为4分,其表弟评分为5分;2.先证者及其表弟患有轻中度贫血,血常规计数均显示白细胞增高,血小板计数严重减少。免疫球蛋白检测中先证者的Ig G、Ig A和Ig M均减少,Ig E正常,表弟Ig G和Ig E增高,Ig A减低,Ig M正常。淋巴细胞检测中两人总T细胞均增高,CD19+/20+均减低,其中先证者CD3+和CD3-CD56+增高,CD3+CD4+和CD3+CD4+/CD3+CD8+正常,CD3+CD8+减低;表弟CD3+CD8+和CD3-CD56+正常,CD3+CD4+和CD3+CD4+/CD3+CD8+减低;3.先证者WASp表达量为3.8%,其母亲WASp表达量为72.8%,正常对照WASp表达量为96%,WB与FCM的结果相符;4.基因测序显示两位患儿均存在WAS基因外显子2上c.158T>C突变,导致氨基酸p.L53P改变,他们的母亲均为突变基因的携带者,同时其表弟还在内含子2发生ivs2273+14C>T突变;5.对突变基因进行突变致病性生物信息分析,结果显示两个突变均可能具有致病性。结论:1.WAS基因c.158T>C错义突变可能是该家系的致病原因。2.WASp表达减少甚至缺如导致先证者临床表型严重。3.应用NGS明确WAS患者的病因,对临床明确诊断及后期的治疗是至关重要的。第二部分一个X染色体倾斜性失活女性Wiskott-Aldrich综合征家系遗传学及分子发病机制研究目的:探讨一个Wiskott-Aldrich综合征(Wiskott-Aldrich syndrome,WAS)的女性患者的分子发病机制。方法:1.收集怀疑为WAS患者家系成员病史。2.采集先证者和其母亲的外周血进行详细的实验室检查。3.流式细胞术(Flow cytometry,FCM)和免疫印迹实验(Western blot,WB)检测先证者和其母亲WAS蛋白(Wiskott-Aldrich syndrome protein,WASp)表达。4.下一代基因测序技术(next generation sequencing,NGS)对先证者进行靶向测序,筛选致病基因,并对先证者父母进行Sanger测序验证。5.PCR(Polymerase chain reaction)扩增雄性激素受体(AR)基因第1外显子CAG重复序列对X染色体失活性进行检测。结果:1.家系调查发现其两个舅舅及表舅均患有免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia,ITP),女性家庭成员无明显症状,符合伴X染色体隐性遗传特征;2.先证者中度贫血,血小板减少伴血小板体积减小,免疫系统异常,肺炎支原体抗体效价1:160。先证者母亲中度贫血,免疫球蛋白Ig M和Ig A低于正常水平,其他无明显异常;3.先证者WASp表达量为20.6%,其母亲WASp表达量为50.4%,均低于正常人的WASp;4.NGS测序发现先证者WAS基因的2号外显子发生c.173T>C基因杂合突变,使蛋白质p.P58L改变,脯氨酸被亮氨酸替代,导致WASp的表达量明显低于正常人。其母亲为突变基因的携带者,父亲为正常成年人;5.DNA甲基化分析发现经甲基化敏感性内切酶HpaⅡ酶切后,先证者及其母亲均存在X染色体失活。先证者携带正常WAS基因X染色体发生了失活,突变基因所在的X染色体保持活性,导致杂合子携带者表现出相应的临床症状。结论:Wiskott-Aldrich综合征女性杂合子携带者可因X染色体倾斜性失活导致患病,临床上对于女性患者应引起高度重视。