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肿瘤的免疫治疗方法已变成近些年的研究热门,以PD-1/PD-L1作为靶点的抗肿瘤诊疗药品给多种非良性肿瘤病员都带来了诊治受益。程序性死亡配体1(programmed death ligand 1:PD-L1)是表达在多种肿瘤细胞表面的一种蛋白,可以与T细胞表面的程序性死亡受体1(programmed death 1:PD-1)受体结合,当受体与配体紧密结合后可诱发NF-κB的转录受到压制,进而导致干扰素-δ正常分泌量变低,然后压制T细胞的正常免疫,最终使能够抑制正常免疫的肿瘤细胞生长的微环境快速形成,使其躲避掉人体的免疫监视和消除作用。而将PD-1/PD-L1通路中断即可使肿瘤细胞生长微环境作用得到抑制,进而使T细胞的对肿瘤的杀伤作用得以恢复,从而增强内源性抗肿瘤免疫效应。本研究的目的就是针对鼠源PD-L1的抗体进行人源化优化改造,以制造高效的单克隆抗体药物。为了获得人源化抗PD-L1抗体序列,采用Ig BLAST对所得鼠源抗PD-L1抗体轻链和重链进行人源化改造,得到优化后抗体模板。并构建pc DNA3.1表达载体。采用瞬时转染技术转染HEK-293细胞进行表达,经SDS-PAGE鉴定17组人源化抗体均正确表达。为对抗体的生物活性建立了间接ELISA检测方法。间接ELISA法的抗原包被浓度最适为0.25μg/ml,抗PD-L1抗体的标准品的起始浓度为0.25μg/ml,封闭液浓度最适为2%BSA,封闭时间最适为2 h,二抗的最佳稀释度为1∶4 000。细胞上清中的抗PD-L1抗体样品1的滴度为125,浓度66.66 ng/ml,灵敏度为6.3ng/ml;样品2的滴度为125,浓度为81.8 ng/ml,灵敏度为5.9 ng/ml。经对样品1和样品2的批内批间重复性试验统计分析,变异系数均<10%。经数据证明,该ELISA法适用于该抗体的检测筛选。使用以上方法表达,并对收集的样品进行活性检测筛选,筛选出亲和力强且在HEK-293细胞中表达的经人源化改造的抗PD-L1单抗组合:1Z2Q,1Z6Q,3Z2Q,3Z6Q,4Z6Q。人源化改造鼠源抗PD-L1抗体初步成功,筛选出生物活性人源化抗体5组,为人源化PD-L1单抗的进一步研究具有一定的促进意义。