塞来昔布对乏氧鼻咽癌CNE-2细胞放疗增敏作用的研究

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目的:本实验旨在探讨塞来昔布对乏氧鼻咽癌CNE-2细胞放疗增敏作用及初步机制的研究。  方法:以鼻咽癌CNE-2细胞为研究对象,选处于对数生长期的细胞进行实验:(1)四唑盐比色法(MTT)实验检测氯化钴(CoCl2)对鼻咽癌CNE-2细胞增殖能力的影响,选出适宜的药物浓度诱导乏氧CNE-2细胞;(2)MTT实验检测塞来昔布对乏氧鼻咽癌CNE-2细胞增殖能力的影响,选出适宜的药物浓度;(3)将实验分为常氧组、乏氧组及乏氧塞来昔布组,克隆形成实验检测塞来昔布作用后乏氧CNE-2细胞的放射敏感性变化;(4)将实验分为常氧对照组、乏氧对照组、乏氧放疗组、常氧放疗组及乏氧塞来昔布放疗组,流式细胞仪(FCM)检测塞来昔布联合放疗对乏氧CNE-2细胞细胞周期和凋亡的影响。  结果:(1)CoCl2作用CNE-2细胞后24h及48h的IC50值分别为521.5umol/l、470.1umol/l;在48小时内,与空白对照组相比,50umol/l、100umol/l的CoCl2作用于CNE-2细胞后,CNE-2细胞的抑制率无明显差别(P>0.05),150umol/l、200umol/l的CoCl2对CNE-2细胞的抑制率有明显差别(P<0.05)。选择100umol/l(接近于20%IC50)浓度的CoCl2用于实验诱导乏氧。  (2)塞来昔布作用于乏氧CNE-2细胞24h及48h后显示:塞来昔布抑制乏氧CNE-2细胞的增殖,呈时间、浓度的依赖性。24h及48h的IC50值分别为38.9ug/ml、36.02ug/ml。选择10ug/ml浓度(低于IC50值的2个浓度)的塞来昔布用于实验。  (3)克隆形成实验表明:在0、2、4、6Gy照射后,乏氧放疗组较常氧放疗组存活分数(SF)增高(P<0.05)。乏氧塞来昔布放疗组较乏氧放疗组存活分数(SF)降低(P<0.05)。构建单击多靶模型拟合细胞存活曲线,常氧组、乏氧组及乏氧塞来昔布组D0、Dq、N分别为(2.82,2.85,2.22)、(1.75,2.05,1.35)、(1.857,2.051,1.833)。相对于乏氧放疗组而言,乏氧塞来昔布放疗组的放射增敏比(SER)为1.28。  (4)流式细胞仪检测结果表明:比较常氧对照组、乏氧对照组、乏氧放疗组、常氧放疗组及乏氧塞来昔布放疗组,细胞周期G0-G1分布逐渐增加,细胞周期S期分布逐渐减少,凋亡率增加(P<0.05)。  结论:1、塞来昔布能抑制乏氧鼻咽癌CNE-2细胞的增殖。  2、塞来昔布可增强乏氧鼻咽癌CNE-2细胞的放疗敏感性。  3、其机制可能与塞来昔布抑制乏氧鼻咽癌CNE-2细胞G0-G1期阻滞及诱导乏氧CNE-2细胞凋亡有关。
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