非培养与培养方法对高海拔藏族人皮肤细菌的研究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:angelcaoxian
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本研究对采集到的10个高海拔藏族人额头部位的皮肤微生物,使用5种培养基进行细菌培养。对培养得到的细菌菌落进行收集,与原始皮肤样本采用同样的DNA提取方法,共同进行16S r RNA基因V3-V4区测序,来探究人体皮肤细菌的多样性以及可培养性。培养得到的细菌菌落进行纯化、分离与鉴定,获得人体皮肤细菌资源。构建小鼠亚急性光损伤模型,通过涂抹分离得到的细菌进行皮肤细菌定植与紫外辐照,筛选对皮肤具有紫外辐照保护作用潜在应用价值的菌株。研究内容与结果如下:1.高海拔藏族人额头皮肤表面的菌群组成:主要包括4个门,变形菌门Proteobacteria(44.48%)、厚壁菌门Firmicutes(29.19%)、放线菌门Actinobacteria(13.04%)和拟杆菌门Bacteroidetes(9.57%);前10个属有:假单胞菌属Pseudomonas(10.20%)、水栖菌属Enhydrobacter(8.76%)、金黄杆菌属Chryseobacterium(6.90%)、葡萄球菌属Staphylococcus(5.85%)、不动杆菌属Acinetobacter(3.68%)、狭义梭菌属Clostridium sensu stricto 1(3.32%)、芽孢杆菌属Bacillus(2.89%)、鞘氨醇单胞菌属Sphingomonas(2.37%)、Peptoclostridium(2.35%)和冷杆菌属Psychrobacter(2.26%)。2.纯培养同种培养基上生长的菌落经过收集、混合、DNA提取、16S r RNA测序后与原始皮肤样品的测序结果进行对比,在OTU水平上,统计非培养皮肤样本所得总OTU,通过纯培养可以得到19.74%。OTU丰度大于0.01%时,纯培养可以得到非培养皮肤样本高于0.01%丰度OTU的27.14%。OTU丰度大于0.1%时,纯培养可以得到非培养皮肤样本高于0.1%丰度OTU的47.67%。但每个皮肤样本的培养结果差异很大。样品skin12培养出较多的OTU,在不同丰度水平上,纯培养所得OTU占非培养所得OTU的35.29%、46.42%、82.14%。3.分离纯化得到340株纯培养细菌,包含了4个门、24个科分类水平下的42个属。4.动物模型试验初步探究来源于高海拔藏族人皮肤的菌株对皮肤紫外辐照的保护效果:选取了6株菌Arthrobacter gandavensis、Bacillus psychrosaccharolyticus、Erwinia soli、Paenibacillus amylolyticus、Paenibacillus terrae和Psychrobacter psychrophilus。皮肤细菌定植与紫外辐照试验后,对皮肤切片按照病理损伤分级进行评分,最终的皮肤形态组织评分结果显示,试验组C(Erwinia soli)与紫外辐射对照组相比,差异有统计学意义(p<0.01)。本研究揭示了高海拔藏族人皮肤表面具有丰富的微生物资源,且具有极大的潜在应用价值。通过常见的易获得的培养基能够培养得到绝大多数的皮肤细菌。
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