【摘 要】
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苹果斑点落叶病是苹果早期落叶病的一种,主要危害叶片,引起环状坏死斑,初期淡褐色,后期会形成深紫色环斑。此病也会危害嫩枝,但很少侵染果实。引起苹果斑点落叶病的病原（Alternaria alternata f.sp.mali）,在我国主要苹果种植区广泛分布,威胁苹果产业的健康发展。目前对于该病缺乏有效的防止手段,为挖掘和创建绿色环保的防治技术,本研究自病害常发区的老果园大量筛选和分离了病原菌,获得了
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苹果斑点落叶病是苹果早期落叶病的一种,主要危害叶片,引起环状坏死斑,初期淡褐色,后期会形成深紫色环斑。此病也会危害嫩枝,但很少侵染果实。引起苹果斑点落叶病的病原（Alternaria alternata f.sp.mali）,在我国主要苹果种植区广泛分布,威胁苹果产业的健康发展。目前对于该病缺乏有效的防止手段,为挖掘和创建绿色环保的防治技术,本研究自病害常发区的老果园大量筛选和分离了病原菌,获得了一株致病力衰退的弱毒菌株（Aa-YL3c）,该菌株表型不正常,生长速度缓慢。进一步研究发现此弱毒菌株（Aa-YL3c）携带了真菌病毒。利用分子生物学技术和细胞学技术,我们对此弱毒菌株及其携带的病毒进行了相关生物学研究,主要研究内容和结果如下:1、弱毒菌株Aa-YL3c的科赫氏法则验证和分子鉴定。明确Aa-YL3c能够侵染苹果树叶,引起斑点落叶病。利用子囊菌通用引物扩增获得菌株的ITS保守序列,NCBI同源性比对明确Aa-YL3c为链格孢菌Alternaria alternata。2、Aa-YL3c携带的真菌病毒的鉴定。利用高通量测序和RACE克隆测序,获得Aa-YL3c携带病毒的全长基因组序列。该病毒基因组含有一条单链正义RNA片段,全长为14102 nt,含有一个开放阅读框,编码一个4227 aa的多肽链,分子量大小为478.22 k Da。5’端有491 nt的非编码序列,3’端有1421 nt的非编码序列和poly A尾序,编码的多肽链含有以RNA为模板的RNA复制酶（RDRP）保守结构域DEXDc,DEAH。利用该病毒RDRP序列构建系统发育树,结果表明该病毒与昆虫单链RNA病毒Wh IV-14亲缘关系最近。将该病毒命名为链格胞菌弱毒病毒1（Alternaria alternate hypovirulence virus 1,Aa HV1）。3、Aa HV1的生物学研究。利用单胞分离纯化技术,获得了弱毒菌株Aa-YL3c的脱毒菌株,通过对无毒、有毒菌株菌落形态观察和生长速度分析发现Aa HV1侵染后显著影响寄主真菌的生长和发育。离体苹果树叶接种实验发现,Aa HV1侵染显著抑制病原菌Aa-YL3c的致病力,与脱毒菌株相比,Aa-YL3c在苹果叶片上侵染形成的病斑显著变小。Aa HV1可经菌丝融合水平扩散,也可经分生孢子垂直传播,分生孢子的传播效率约为94%。然而Aa HV1不能经菌丝融合侵染链格孢木瓜分离株Aa-PP2,通过原生质体转染的方法将病毒导入到Aa-PP2,菌丝生长形态及致病力相关分析发现Aa HV1对Aa-PP2无显著影响。本研究不仅为苹果斑点落叶病提供了具有生防潜力的致病力衰退菌株,而且进一步丰富了真菌病毒的研究。
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