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禽网状内皮组织增生病(Reticuloendotheliosis,RE)是由禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起的一群病理综合征,主要表现为生长迟缓、急性网状细胞肿瘤和淋巴组织慢性肿瘤。REV通常与其他病毒混合感染,并易整合到宿主基因组中,再加上感染后的免疫抑制,导致RE的防控工作越来越困难。本研究旨在通过对env蛋白和gp90蛋白免疫原性的比较,从而筛选出免疫原性更好的蛋白,为RE亚单位疫苗的研究奠定基础。首先,本研究选择毕赤酵母表达系统对REV的囊膜蛋白env进行了表达,构建了含有多个Menv表达盒的重组SMD1168菌株和重组GS115菌株,在摇瓶内利用甲醇进行诱导表达。结果表明,重组env蛋白在构建的重组毕赤酵母菌株中均能成功表达,在GS115菌株中的表达量明显超过在SMD1168菌株中的表达量;重组菌株GS115/pAO815-2Menv的表达量高于GS115/pAO815-4Menv和GS115/pAO815-6Menv的表达量,说明表达盒数量的增加对env蛋白的表达量没有显著的提升作用。通过对诱导条件的优化,重组菌株GS115/pAO815-2Menv在摇瓶内的表达量可达到0.5 g/L。为了获得大量的重组env蛋白和gp90(上清)蛋白,本研究对两种蛋白的发酵培养条件进行了一系列的优化,并对发酵得到的蛋白进行纯化,将纯化前后的蛋白分别置于室温、4℃和-20℃保存以比较其稳定性。结果表明,重组菌株GS115/pAO815-2Menv在29℃、pH=5.5的条件下发酵培养,env蛋白的表达量最高,高达3.5 g/L;重组菌株SMD1168/pPIC9k-gp90在27℃、pH=6.0的条件下发酵培养,gp90(上清)蛋白的表达量最高,高达1.1 g/L;可以通过亲和层析的方法得到纯度较高的重组env蛋白和gp90(菌体)蛋白,gp90(上清)蛋白通过30 kD的超滤管进行浓缩处理;三种蛋白经纯化后稳定性有所提升,但不显著,仍存在严重的降解问题。通过动物攻毒保护实验,对gp90(上清)蛋白、gp90(菌体)蛋白和env蛋白的免疫原性进行了比较。结果表明,三种蛋白均能产生较高水平的ELISA抗体和中和抗体。同时,相对于对照组的病毒载量,gp90(上清)蛋白免疫组的病毒载量降低2.36×10~5倍,gp90(菌体)蛋白免疫组的病毒载量降低6.61×10~3倍,env蛋白免疫组的病毒载量降低6.08×10~3倍。这些结果表明,三种蛋白均具备良好的免疫原性。本研究成功实现了env蛋白在毕赤酵母中的表达,并通过优化发酵培养的条件,可获得大量免疫原性良好的重组蛋白,能有效保护SPF鸡免受REV的感染。