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目的：应用Fox01与TORC2基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术,在不同葡萄糖浓度条件下调控胰岛β细胞株NIT-1细胞中FoxO1与TORC2基因表达,观察FoxO1与TORC2基因调控对胰岛β细胞增殖和凋亡的影响,检测FoxO1与TORC2基因表达的相互关系和对相关蛋白的信号传导途径的影响,为2型糖尿病治疗提供新的理论依据。方法：1.通过优化转染条件,获取有效的siRNA片段。经由人工设计合成3对(?)ORC2siRNA (TORC2siRNA-1、TORC2siRNA-2、TORC2siRNA-3)及用带有荧光标记的阴性对照siRNA优化转染条件。根据最优转染条件,将3对TORC2siRNA通过t脂质体转染NIT-1细胞,用Western blot法检测转染24小时后对细胞内相关基因基因表达的干扰效果,并筛选出最佳TORC2siRNA序列。2.不同浓度葡萄糖干预。将NIT-1细胞株按照1×106个/孔种于6孔细胞培养板,继续培养48小时后,分别加入不同浓度的葡萄糖,依照RPMI1640培养基中葡萄糖浓度的不同分为4组：组1为5.6mmol/L,组2为11.1mmol/L组3为16.7mmol/L,组4为27.6mmol/L,继续培养到120小时。3.FoxO1siRNA及TORC2siRNA的转然后干预实验。根据筛选出的最优转染条件,在不同浓度葡萄糖干预24小时后,分别加入FoxO1、TORC2的小分子siRNA干预24小时和48小时。4.应用以下四种方法对实验进行监测及评估：①MTT法测定NIT-1细胞的存活和生长情况；②放射免疫法测定胰岛素分泌水平；③Hoechst3(?)258免疫荧光细胞核染色法观察细胞凋亡情况；④应用Western-blot技术检测不同干预条件下,细胞内FoxO1、TORC2等基因的蛋白表达情况；结果：(1)转染荧光标记的阴性对照siRNA24小时后,荧光显微镜下观察细胞内荧光显色,当siRNA浓度为160pmol/L,与SBI公司的PureFectionTM Nanotechnology-based Transfection Reagent转染试剂按照体积比(v：v)为4：1混合时,转染效果最佳,细胞存活率高。(2)MTT检测细胞增殖结果显示：应用FoxOlsiRNA印制FoxO1基因表达,细胞增殖水平升高,明显高于正常对照组；相反,应用高浓度葡萄糖干预高表达FoxO1基因则会显著抑制NIT-1细胞增殖(P<0.05)。(3)放射免疫法检测胰岛素分泌结果显示：应用FoxO1siRNA抑制FoxO1基因表达,细胞胰岛素分泌水平升高,明显高于正常对照组；高表达FoxO1基因则明显抑制胰岛素分泌(P<0.05)。(4)免疫荧光细胞核染色法检测细胞凋亡情况：应用FoxO1siRNA抑制FoxO1基因表达,降低细胞凋亡率,明显低于正常对照组；而高表达FoxO1基因,则显示细胞凋亡增多(P<0.05)。(5)免疫蛋白印记法检测蛋白的表达情况：①应用FoxO1siRNA抑制FoxO1基因表达,TORC2蛋白表达量随FoxO1表达量的下降而降低,且明显低于未转染FoxO1siRNA组：AKT蛋白表达量则无明显变化。②应用TORC2SiRNA抑制TORC2基因表达,FoxO1蛋白表达随TORC2蛋白表达量下降而降低。结论：FoxO1siRNA转染可以抑制FoxO1基因表达,促进细胞的增殖,降低细胞的凋亡,促进胰岛素的分泌,同时TORC2siRNA转染也可以降低TORC2基因的表达；高表达FoxO1(?)抑制NIT-1细胞增殖,促进细胞凋亡,降低胰岛素分泌。从两者的关系研究发现,通过抑制TORC2基因的表达,FoxO1基因的表达也明显降低。