本文主要针对大花蕙兰组织培养中的几个关键性技术问题,分别以茎尖和假鳞茎为外植体,探讨了优化配方、原球茎增殖、褐变机理以及褐变防止等问题,重点研究了褐变的机理,为大花蕙兰的工业化育苗提供了技术参考依据,同时也为木本植物中常见的褐变问题的解决奠定了理论基础。主要的研究结果如下:在对大花蕙兰最佳配方的培养基筛选过程中,得到如下结论:原球茎诱导培养阶段:最适培养基为MS + BA1.5mg/l + NAA0.1 mg/l,2个月后启动率可达81.4%;原球茎增殖培养阶段:最适培养基为MS+BA1.0mg/l+NAA0.03mg/l,原球茎增殖最快,一个月后增殖量可达5.8;原球茎分化培养阶段:MS + BA0.5mg/l + NAA0.8mg/l最好,一个月分化率可达89.4%;生根培养阶段:促进根生长的最适培养基是1/2MS + BA0.3mg/l + NAA0.5mg/l+香蕉泥150g/l,根系粗壮。各种因素对原球茎增殖的影响:液体振荡培养、薄层切割培养、5个大小的切块利于原球茎的增殖(见图3.1~图3.3)。结合分析对照组和热激组的总酚含量(TP)、褐变度(BD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸裂解酶(PAL)活性等变化关系(见图4.1~图4.4),可以看出热激组TP、BD、PAL活性以及PPO活性都比对照组低。推测伤害时褐变的机理可能是PAL酶先催化苯丙氨酸合成单酚或多酚衍生物,衍生物又与PPO酶作用,从而导致褐变的发生。热激时,可能生成了热激蛋白(HSPs)而不是PAL酶,导致合成的总酚含量降低,因而PPO酶和其他未知物质就与较少的酚类物质作用,抑制褐变的发生。褐变的控制:预处理、抗坏血酸、活性炭的加入对褐变的防止作用甚微;聚乙烯吡咯烷酮(PVP)对褐变有一定的防止作用;然而5min与2min热激组对防止褐变起到了满意的效果,尤其是5min热激处理组防止效果更好。