阳离子多肽的组装结构及其缓释抗菌研究

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细菌的耐药性问题已经成为全球最紧迫的公共卫生问题之一,因此开发新型抗菌剂和抗菌材料的任务迫在眉睫。抗菌肽是生物体产生的一类对抗外源性病原体的防御性活性多肽,因其难以产生耐药性,广谱抗菌和良好的生物相容性,被认为是抗生素的潜在替代品之一。而传统的抗菌肽在生物体内发挥作用时间短,很难应对长效抗菌的实际应用需要,因此构建新型阳离子自组装缓释多肽成为当前研究的新方向。淀粉样多肽KLVFFAE本身具有良好的自组装能力,且对细胞膜有较强的破坏性。本文基于该段多肽序列为参照模板,并结合抗菌肽的物理化学结构特征和自组装多肽的构建规则,我们设了两种阳离子两亲性自组装多肽KKKFAFAFAFAKKK和KKKKKKFAFAFAFA,并测试其单体的抗菌性能,重点构建阳离子多肽组装体,进一步探索其缓释抗菌应用的可能性。主要的研究内容如下:(1)阳离子多肽单体的抗菌活性两种阳离子多肽在PBS溶液中的二级结构均为无规结构,并且都具有抗菌活性,但表现出对革兰氏阴性菌更敏感,在4 h内就可以快速杀死细菌。与多肽K6(FA)4相比,多肽K3(FA)4K3显示出更好的抗菌活性。阳离子多肽单体与大肠杆菌作用后,菌体表面起皱凹陷,并产生了孔洞。最后两种阳离子多肽在MIC和MBC或其附近没有细胞毒性,有潜力成为治疗细菌感染的抗菌剂。(2)阳离子多肽纳米纤维的缓释抗菌在pH=12的溶液中孵育的两种多肽的二级结构分别α-螺旋和β-折叠,且能够逐渐自组装为纳米纤维,将pH调至7,继续孵育,两种多肽的二级结构逐渐转为无规结构,同时纳米纤维逐渐解组装为纳米结构,并最终完全解聚为单体。两者的自组装过程相近,但多肽K3(FA)4K3的解组装过程快于多肽K6(FA)4。随着解组装时间的延长,两者的抗菌速率和抗菌活性都有所提高,由最初的5 h内杀死细菌到解组装48 h后,1 h内即可杀死全部细菌。与多肽K6(FA)4相比,解组装1 day内,多肽K3(FA)4K3显示出更快的抗菌速率,而在2 day后,两者显示出相近的抗菌活性。
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