前言：　　 膀胱过度活动症(OveractiveBladder,OAB)是一种常见病。ICS于2002年修订OAB的定义是尿急,伴有或者不伴有急迫性尿失禁,常伴有尿频和夜尿增多。由于OAB的机制目前不十分清楚,其在临床的诊断治疗不规范,治疗效果并不十分理想,因此,探讨OAB机制,寻找新的治疗靶点是目前OAB研究的重点之一。　　 神经生长因子(NGF)的研究在1986年曾获诺贝尔医学生理学奖,在维持许多器官自主神经分布中起重要作用。研究提示NGF和神经分布有直接联系。在新生动物,针对NGF的抗血清处理导致膀胱的神经严重缺失。相反,注射NGF能增加大鼠膀胱神经分布。人类NGF的基因定位于1号染色体上。在各种组织中,成熟的具有生物活性的NGF是由2条118个氨基酸组成的单链通过非共价键结合而成的二聚体。NGF的单体是一个延长的结构,单体一端有三个发夹举;另一端有“半胱氨酸结”结构,具有稳定分子的作用。　　 生长相关蛋白(GAP-43)是一种细胞内的生长相关蛋白,在神经生长与再生时时参与神经通路起源与分支,对成熟细胞的突触前膜的形成有作用,可导致神经递质的释放、细胞内吞、接合囊循环等。发育和再生过程中神经元高水平表达并将之运输至生长锥;而当生长锥与靶器官一旦接触,则其神经元内的含量迅速下降。根据GAP-43在轴突再生中的变化规律,可以认为,GAP-43强阳性神经元表明其轴突处于再生过程中,由强阳性转为弱阳性是再生神经功能完善的表现,而中等阳性当为功能建立未完善的特征。　　 长期膀胱出口梗阻可引起膀胱一系列的形态及功能的改变,其中OAB是最常出现的变化,有的大鼠解除梗阻后,OAB症状仍要持续,为了探讨NGF及GAP-43在OAB发生机制中的作用,本课题拟从首先构建OAB三种大鼠模型,使用尿流动力仪来确认大鼠成模,并比较三种模型优缺点。在此基础上应用免疫组化方法,Realtime-PCR及Westblot来检测大鼠膀胱标本中NGF及GAP-43含量,在组织、蛋白、基因三个层次,确定二者间关系。上述研究将有助于提高对OAB发病机制的认识,为探索治疗OAB的新的靶点提供了理论和实验依据。　　 材料和方法：　　 实验分为构建OAB模型大鼠和检测NGF及GAP-43两部分,构建OAB大鼠模型使用三种梗阻方法:耻骨上入路、经闭孔耻骨后入路及会阴入路三种方法,以找到一种简单高效的建立模型的方法。在此基础上,利用成模大鼠检测其膀胱中NGF及GAP-43的含量,并研究其在OAB发病中的可能机制。　　 1、构建OAB大鼠模型部分　　 (1)建立BOO大鼠,梗阻方法包括经耻骨上膀胱颈梗阻、经会阴尿道梗阻、和经闭孔耻骨后中段尿道梗阻。　　 (2)充盈期膀胱测压检查确定BOO大鼠6-8周后是否存在充盈期不稳定收缩,按ICS的传统标准大于15cmH20的不稳定收缩确定0AB大鼠。　　 2、NGF及GAP-43检测部分　　 (1)病理标本的制备及形态定量分析:取每只大鼠的膀胱组织,石蜡包埋切片,常规HE染色。对HE染色标本进行病理观察。　　 (2)NGF及GAP-43检测:酶联免疫吸附测定法(enzyme-1inkedimmunosorbentassay,ELISA),westenblot,realtime-PCR检测各组大鼠膀胱组织。免疫组化染色:采用SABC(StreptActividin-BiotinComplex)法,对石蜡包埋标本行NGF及GAP-43相对含量的测定。大鼠处死后,剖腹取膀胱组织50mg,液氮速冻,按RNA提取试剂盒操作说明进行RNA的提取,扩增NGF及GAP-43序列,测定含量。　　 结果：　　 1、三种动物模型的构建与确定:　　 三种方式成模率:与经会阴组及耻骨上组对照组比较,闭孔耻骨后组模型组大鼠成模率与耻骨上组相近(P＞0.05),此二组较会阴组明显增高(P均＜0.05),但在副损伤方面优于其它二组,说明此种方法更为先进。　　 2、NGF及GAP-43检测部分　　 (1)NGF的表达水平　　 免疫组化,westenblot和real-timePCR结果显示:与正常对照组比较,BOO组膀胱组织表达上升(p＜0.05)。与BOO组对比,BOO+OAB组NGFmRNA和蛋白表达显著增高(p均＜0.05)。　　 (2)GAP-43的表达水平　　 免疫组化,westenblot和real-timePCR结果显示:与正常对照组比较,BOO组膀胱组织表达上升(p＜0.05)。与BOO组对比,BOO+OAB组NGFmRNA和蛋白表达显著增高(p均＜0.05)。具有统计学意义。　　 结论：　　 1、经闭孔耻骨后入路构建膀胱出口梗阻模型是一种可行方法。　　 2、NGF及GAP-43在OAB大鼠膀胱组织中于免疫组化、蛋白、mRNA水平差异明显,说明其可能参与OAB形成过程。