MtrA是放线菌中一个非常重要的保守调控因子。MtrA是结核分枝杆菌和谷氨酸棒状杆菌细胞生存所必需的调控因子。结核分枝杆菌中MtrAMTB通过与oriC相互作用调节细胞增殖。而谷氨酸棒状杆菌中MtrACGL的作用表现在维持细胞形态、抗生素的耐药性和维持细胞渗透压;它的靶基因具有多种功能,例如可以编码推定的细胞壁肽酶、转运蛋白和膜蛋白。本文对委内瑞拉链霉菌中的MtrA功能进行初步研究,旨在探讨该调控蛋白在委内瑞拉链霉菌生命发育周期中起到的作用,以及对链霉菌气生菌丝形成的调控作用。本实验中先构建含有目的基因上下游同源臂的敲除质粒,进行属间接合转移实验,筛选获得调控基因mtrA/sven2756的缺失突变菌株△2756。将委内瑞拉野生型菌株ISP5230与△2756进行表型分析以及生长曲线绘制,观察到突变菌株△2756的生长速度明显变慢,且无法分化产生气生菌丝及孢子。为进一步确认突变菌株△2756的表型变化是由于缺失sven2756,本研究采用整合型载体pMS82,将含有sven2756启动子区域的完整编码序列连接到该载体上,通过接合转移回补突变菌株△2756获得回补菌株C-△2756。对菌株进行表型分析及生长曲线绘制,观察到回补菌株的生长情况以及气生菌丝孢子的产生情况接近于野生型菌株ISP5230,因此可得出△2756的表型变化确实是由sven2756的缺失引起的。富集培养菌株,然后通过Real-time PCR对两菌株中部分基因的表达进行了定量分析。结果表明ISP5230与△2756相比,控制链霉菌气生菌丝产生的几个关键基因bldD、bldH、bldN、bldG、bldC、bldM的表达有显著的差异。为进一步确定SVEN2756参与生长发育、气生菌丝生成的调控,我们表达并纯化His-SVEN2756融合蛋白。通过EMSAs体外结合试验,得出SVEN2756与bldD的启动子有直接的相互作用,而与基因bldH、bldN、bldG、bldC、bldM的启动子之间没有相互作用。综合以上实验结果,本研究发现放线菌中保守调控因子MtrA在委内瑞拉链霉菌中可能参与生长发育、气生菌丝及孢子产生的调控,但具体调控机制尚不明确。