环状RNA hsacirc0008278在胶质母细胞瘤中的表达及临床意义和功能研究

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[目的]1.本课题旨在分析胶质母细胞瘤和正常脑组织之间差异表达的circRNAs;2.比较hsa circ0008278在胶质母细胞瘤和正常脑组织中的表达情况,并分析其与胶质母细胞瘤患者临床特征和预后的相关性;3.干扰hsa circ 0008278在U87,U251和LN229胶质瘤细胞系的表达,观察其对胶质瘤生长的影响。[方法]1.利用RNA-seq对6例胶质母细胞瘤组织和6例正常脑组织进行测序,以差异倍数≥2倍且p≤0.05为标准分析差异表达的circRNAs。对差异表达的circRNAs的宿主基因进行GO分析和KEGG通路分析。随机选取差异表达的circRNAs,利用RT-qPCR方法对6例正常脑组织和45例胶质母细胞瘤组织进行检测,验证测序结果。2.利用RT-qPCR方法检测6例正常脑组织和45例胶质母细胞瘤组织中hsa circ 0008278的表达水平。搜集胶质母细胞瘤患者相应临床资料,并采用SPSS23统计分析hsa circ 0008278的表达水平与胶质母细胞瘤患者临床特征和预后的相关性。3.构建hsa circ 0008278敲减和过表达质粒,转染胶质瘤细胞系U87,U251和LN229,观察干扰hsa circ 0008278对胶质瘤细胞增殖,克隆形成和侵袭迁移能力的影响。[结果]1.测序结果显示正常脑组织与胶质母细胞瘤组织之间共有31个circRNAs差异表达,其中13个在胶质母细胞瘤组织中表达升高,18个表达降低。GO分析和KEGG通路分析发现,差异表达的circRNAs涉及多个生物学途径和信号通路。2.随机选取5个差异表达的circRNAs在6例正常脑组织和45例胶质母细胞瘤组织进行RT-qPCR验证发现hsacirc 0008278在胶质母细胞瘤中表达水平显著降低,且hsa circ0008278的表达水平与胶质母细胞瘤患者的无进展生存期(PFS)和总体生存期(OS)呈正相关。3.在胶质瘤细胞系中过表达hsa circ0008278后,胶质瘤的增殖,克隆形成和侵袭迁移能力明显下降,敲减hsa circ 0008278对胶质瘤的生物学特征则具有相反的作用。[结论]在胶质母细胞瘤中存在差异表达的circRNAs,这些circRNAs参与了细胞中增殖,分化,信号转导等多种生物学过程,对调控胶质母细胞瘤发生发展具有重要作用。hsa circ 0008278在胶质母细胞瘤中表达水平显著降低,且hsacirc 0008278的低表达与GBM患者的不良预后显著相关。体外实验,干扰hsa circ0008278的表达可以影响胶质瘤的生物学特征,证实hsacirc 0008278在胶质瘤的发生发展中发挥了重要作用,为胶质瘤的基因治疗提供了新的靶点。
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