研究背景多药联合已经成为临床治疗的必要手段,我们在收获疗效的同时,也感慨由于药物相互作用所导致的负面效应,因此研究药物的相互作用以保证临床用药的安全合理,具有十分重要的现实价值。目前关于西药之间相互作用的研究已经屡见不鲜,但是对于中西药之间的相互作用,人们的关注和认识显然还不够,而鉴于临床中西药联用越来越普遍的现象,研究中西药合用时的药物相互作用,以保证用药的安全合理,已经刻不容缓。银杏叶提取物作为最常用的一类中药具有多重药理作用,包括降血脂、改善内皮细胞功能、降低血液粘稠度、清除自由基和抗动脉粥样硬化等,在临床常能见到同其它药物联合使用,辛伐他汀便是其中之一。辛伐他汀作为他汀类药物的代表,不仅是降低LDL的一线药物,还可以稳定动脉斑块,明显减少致死性和非致死性心血管事件的发生率,其不良反应一般表现为皮疹、头痛和胃肠不适,严重者可以出现肝损伤和横纹肌溶解,威胁生命,然而无论是辛伐他汀的疗效还是不良反应的发生都与其血药浓度之间存在着明显的正相关。药物的血浆浓度可以受多重因素的影响,其中药物的代谢是影响血药浓度的关键环节,因此凡是可以影响辛伐他汀代谢的药物,在与其合用时,都可能通过药物的相互作用来影响其疗效和不良反应的发生。辛伐他汀在人体内的代谢和生物转化主要是通过肝微粒体细胞色素P450（CYP450）同工酶中的CYP3A,CYP450参与了绝大多数药物的代谢,是药物代谢过程中的主要限速酶,在药物的相互作用中扮演了重要角色。有很多研究表明,银杏叶提取物可以影响CYP450多种同工酶的活性,其中就包括CYP3A,但在不同的研究中,结果还存在较大的分歧。目前我们推断银杏叶提取物同辛伐他汀之间可能存在着药物的相互作用,但是这种相互作用究竟如何,银杏叶提取物究竟是诱导还是抑制辛伐他汀的代谢,我们还没有结论。研究目的本实验课题是针对银杏叶提取物同辛伐他汀之间的相互作用进行研究,以揭示银杏叶提取物对辛伐他汀代谢及其代谢关键酶CYP3A的影响,除了可以为两药在临床的合理联用提供一定的实验依据,好可以进一步提示银杏叶提取物同其他CYP3A底物药物的相互作用。研究方法1实验动物及分组雌性SD大鼠32只,体重200±20g。将32只大鼠随机分为4组,每组8只,分别为:生理盐水对照组（10ml·kg-1）;PB诱导组（80mg·kg-’）^[1];银杏叶提取物低剂量组(20mg·kg^-1);银杏叶提取物高剂量组(200mg·kg^-1)。均为灌胃给药,一天1次,连续10天。2肝微粒体制备于末次给药后将大鼠全部断颈处死,灌注后摘取肝脏,滤纸吸干并称重,按照1/4（w/v）加入磷酸盐缓冲液Ⅰ制备成肝匀浆,离心取上清液于105000 /g再经两次离心后即得肝微粒体沉淀。将微粒体沉淀重悬于磷酸盐缓冲液Ⅱ中,分装并置于-80℃保存待用。3观察指标3.1肝微粒体蛋白含量测定用BCA试剂盒进行肝微粒体蛋白定量分析。3.1.1牛血清白蛋白（BSA）标准曲线制作选择波长545nm,上紫外分光光度机测A值,均做复管测定后取均值绘制标准曲线。3.1.2样品微粒体蛋白含量测定根据BSA标准曲线来读取蛋白浓度。3.2红霉素N-脱甲基酶（ERDase）活性测定ERDase可以反映CYP3A的活性。测定方法参考了徐淑云的《药理实验方法学》。3.3辛伐他汀体外代谢测定用HPLC法测定各组体外反应体系中剩余辛伐他汀的含量。3.3.1体外反应体系0.5 mL的肝微粒体反应体系中含10mmol·L^-1MgCl₂、2.5mmol·L^-1NADP、25mmol·L^-1Na₂G-6-P和1U·mL^-1G-6-PDH。3.3.2样品处理及色谱条件包括检测方法的精密度、回收率及稳定性。3.3.3配制辛伐他汀系列标准浓度3.3.4辛伐他汀体外代谢测定4数据处理实验结果用统计学软件SPSS（10.O版,2000SPSSInc）进行分析,所得数据均用X±S表示双尾F检验来分析各组各指标间的差异。研究结果1肝微粒体蛋白含量1.1 BSA标准曲线曲线方程为:y=0.0005x+0.1303（R²=0.9462）。1.2样品微粒体蛋白测定结果结果显示与生理盐水对照组比较,低剂量银杏叶组微粒体蛋白含量没有明显变化;高剂量组微粒体蛋白增加,为对照组的1.14倍（P<O.05）;阳性对照组蛋白含量显著增加,约为生理盐水对照组的1.7倍（P<O.05）。结果见表1。3辛伐他汀体外代谢测定3.1色谱情况辛伐他汀保留时间为2.5min,与反应体系中其他杂质基线分离良好。3.2辛伐他汀标准曲线曲线方程为:y=4096.7x-110.22（R²=0.9995）,结果表明辛伐他汀浓度在1～10μg·mL^-1的范围内线性关系良好,该法将辛伐他汀的最低检测限定义在1μg·mL^-1。3.3精密度实验结果结果显示10μg·mL^-1;6μg·mL^-1;1μg·mL^-1的日内、日间的RSD分别为:1.44%、2红霉素N-脱甲基酶（ERDase）活性测定结果与生理盐水对照组比较,低剂量银杏叶组ERDase活性略有增加,但没有统计学意义（P>0.05）;高剂量组ERDase活性显著增加,约为对照组的1.8倍（P<O.05）。结果见表2。1.72%;1.57%、1.83%;2.2%、2.81%。3.4回收率实验结果辛伐他汀浓度在1ug·mL^-1;6ug·mL^-1;10ug·mL^-1的相对回收率及相应RSD分别为:103.33%、2.2%;99.37%、1.58%;99.53%、1.44%。辛伐他汀浓度在1ug·mL^-1;6ug·mL^-1;10ug·mL^-1的绝对回收率及相应RSD分别为:96.27%、2.26%;97.18%、1.58%;97.12%、1.44%。3.5稳定性试验分别于1、3、7、10、14d进样测定,辛伐他汀浓度在1、6、10μg·mL^-1的RSD分别为2.10%、1.06%、1.83%。3.6辛伐他汀体外反应结果结果显示与生理盐水对照组比较,PB组和高剂量银杏叶组辛伐他汀体外代谢均显著加快,差别具有统计学意义（P<O.05）;而低剂量银杏叶组与生理盐水组比较,辛伐他汀体外代谢并没有明显改变（P>O.05）,结果见表3。讨论1细胞色素P450与药物相互作用细胞色素P450缩写CYP450,是一种单加氧酶,由于还原性的P450与一氧化碳的复合物在波长450nm处有最大的吸收峰而得名。CYP450参与了绝大多数药物的代谢,是药物代谢过程中的主要限速酶,在药物的相互作用中扮演了重要角色。药物在体内的代谢主要经历两步反应,第一步为Ⅰ相反应,其间药物被氧化、还原或水解为极性更大的代谢物,催化Ⅰ相反应的关键酶即为CYP450。在CYP450的大家族中与药物代谢有关的酶主要为CYP1、CYP2、CYP3家族中7种重要的亚型:CYP1A2（占CYP450代谢总药物的4%）、CYP2A6（2%）、CYP2C9（10%）、CYP2C19（2%）、CYP2D6（30%）、CYP2E1（2%）、CYP3A4（50%）。2银杏叶提取物与细胞色素P450银杏叶提取物的主要活性成分有两大类,分别为黄酮类和萜内酯类。其中黄酮约占24%,主要包括槲皮素、山萘酚、异鼠李素及其甙类化合物;萜内酯类约占6%,以银杏内酯和白果内酯为主。有研究表明槲皮素和山萘酚可以明显抑制CYP3A的活性,并推测其作用环节可能发生在表达后水平。另外有人在研究中发现,银杏叶的另一类主要成分三萜内酯类化合物,银杏内酯和白果内酯对CYP3A也呈现一定的抑制作用,照此来推测,我们较容易认为银杏叶提取物整体应该抑制CYP3A的活性,但是国外的一项研究却得出了完全不同的结论。为了明确这一点,以便进一步探讨银杏叶提取物对辛伐他汀及其他CYP3A底物代谢影响的机制,本实验也进行了相关的研究,并且得出了一些结论:银杏叶提取物对CYP3A表现出一定的诱导作用,但是这种作用要受到剂量的影响,低剂量的银杏叶提取物只呈现出一定的诱导趋势,但并没有统计学意义,只有大剂量使用银杏叶制剂时,才出现对CYP3A活性的显著性诱导。这样,我们不难推测可能存在某一剂量值,恰好是银杏叶提取物产生诱导作用的临界点。另外本实验的研究对象是大鼠,而且体外实验是完全排除了体内影响因素的理想状态,所以此结论并不能直接推广到人。但是它可以给我们一些提示和线索,以提高人们对银杏叶提取物影响药物代谢关键酶GYP450的关注。3银杏叶提取物与辛伐他汀在本实验条件下,低剂量银杏叶制剂与辛伐他汀合用时,并没有显著的相互作用发生,提示两药在常规剂量下的合用是基本安全的;而在高剂量银杏叶组（相当于临床常用剂量的10倍）,银杏叶提取物则可以明显促进辛伐他汀的体外代谢,酶学研究也表明,高剂量银杏叶制剂可以诱导大鼠体内CYP3A的活性。综合以上结果,可以推断当高剂量银杏叶制剂与辛伐他汀合用时很可能会降低辛伐他汀的血药浓度,从而降低其不良反应的发生,但同时也可能降低辛伐他汀的疗效。而多项研究又证明,银杏叶提取物中的一些成分可以明显降低血甘油三酯和胆固醇的含量。这样,银杏叶本身的降脂作用是否可以弥补其对辛伐他汀疗效的影响,而使两者在合用时出现减毒效不变甚至减毒增效的相互作用,当然要证明这一点还需要更深入的研究。另外,本实验中辛伐他汀作为CYP3A的底物探针还可以进一步提示银杏叶提取物对其他CYP3A底物药物代谢的影响,从而为临床药物的合理联用提供一定实验依据。结论在本实验条件下,大剂量的银杏叶提取物（相当于临床常用剂量的1O倍）对实验大鼠肝微粒体CYP3A的活性表现出了一定的诱导作用,此作用虽弱于苯巴比妥钠阳性组,但足以引起同CYP3A底物药物相互作用的发生,辛伐他汀的体外代谢实验进一步证明了这一点,因此推断当辛伐他汀与大剂量银杏叶提取物制剂合用时,可能会通过药物的相互作用而影响到辛伐他汀的疗效。而低剂量的银杏叶提取物（相当于临床常用剂量）由于对CYP3A活性及辛伐他汀的体外代谢没有明显影响,推断在临床的常规剂量下,银杏叶提取物可能不会同辛伐他汀及其他CYP3A底物发生明显的药代学相互作用。