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目的:
探讨系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)及炎症性关节病包括类风湿关节炎(RheumatoidArthritis,RA)、强直性脊柱炎(AnkylosingSpondylitis,AS)患者外周血CD4+T细胞IL-9、IL-17、IFN-γ表达水平和IL-9、IL-17、RORγt、IFN-γmRNA水平,为进一步阐明SLE等免疫相关疾病的发病机制、探索该类疾病新的临床治疗靶点提供理论和实验基础。
方法:
分离SLE和炎症性关节病(RA、AS)患者和健康人外周血单个核细胞(PBMC),通过免疫磁珠分选CD4+T细胞,PMA、Ion刺激,予固定、破膜剂处理,行细胞内染色,通过流式细胞术(FCM)检测CD4+T细胞胞内IL-9、IFN-γ、IL-17水平;通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-9、IL-17、RORγt、IFN-γmRNA水平。应用Pearson相关性检验分析胞内IL-9水平与IFN-γ、IL-17、血清ANA滴度、C3、CRP水平、ESR值之间的关系。SLE和RA分组:①健康人对照组;②病情稳定组;③病情活动组;AS分组:①健康人对照组;②AS患者组。
结果:
(1)FCM检测CD4+T细胞,结果显示免疫磁珠分选CD4+T细胞纯度达90%以上。
(2)SLE病情活动组胞内IL-9水平显著高于病情稳定组(P＜0.01),而病情稳定组又高于健康对照组(P＜0.05);胞内IFN-γ水平SLE病情活动组低于健康人对照组(P＜0.05)。A-CD3/A-CD28、PHA联合刺激后,SLE患者CD4+T细胞胞内IL-9水平较A-CD3/A-CD28、PHA独立刺激组和培养液组显著升高(P＜0.01),而A-CD3/A-CD28、PHA独立刺激组和培养液组之间无明显差别。SLE病情活动组患者IL-9mRNA水平显著高于病情稳定组(P＜0.01),而病情稳定组又高于健康对照组(P＜0.05);SLE病情活动组IFN-γmRNA低于健康人对照组(P＜0.05)。用A-CD3/A-CD28、PHA联合刺激后,SLE患者CD4+T细胞IL-9mRNA表达水平较独立刺激组和培养液组显著升高(P＜0.01)。SLE患者CD4+T细胞胞内IL-9水平与胞内IFN-γ水平及患者血清ANA滴度和C3水平无明显相关。
(3)RA患者病情活动组胞内IL-9的水平高于健康对照组(P＜0.05);RA病情活动组胞内IL-17水平高于病情稳定组(P＜0.01),而病情稳定组胞内IL-17水平又高于健康人对照组(P＜0.05)。RA病情活动组IL-9mRNA的表达高于健康对照组(P＜0.01)和病情稳定组(P＜0.05),而病情稳定组和健康对照组无显著差异(P＞0.05);RA病情活动组IL-17表达高于病情稳定组(P＜0.01),而RA病情稳定组IL-17表达又显著高于健康对照组(P＜0.05),RA病情活动组RORγtmRNA表达高于病情稳定组(P＜0.01),而RA病情稳定组RORγtmRNA表达又显著高于健康对照组(P＜0.01),有统计学意义。RA患者胞内IL-9水平与IL-17水平、ESR、CRP水平无明显相关性。(4)AS患者外周血胞内IL-9和IL-9mRNA水平和健康对照组相比无显著差异(P＞0.05);胞内IL-17水平和IL-17mRNA表达与健康对照组相比显著增高(P＜0.01);胞内IFN-γ水平和IFN-γmPNA表达较健康对照组显著增高(P＜0.01)。
结论:
(1)SLE患者外周血CD4+T细胞中Th9细胞百分比增高,Th1细胞百分比下降。Th9细胞增多、Th1细胞减少可能参与了SLE发病过程;A-CD3/A-CD28联合PHA刺激后,T细胞活化,CD4+T细胞向Th9转化显著增多。
(2)RA患者外周血CD4+T细胞中Th9、Th17细胞的百分比增高,Th9、Th17可能与RA的发病有关。
(3)AS患者外周血CD4+T细胞中Th9百分比无明显增高,而Th17和Th1细胞的百分比显著增高,提示Th17和Th1有可能参与了AS的发病过程,Th9细胞是否参与了AS的炎症过程尚不清楚。