论文部分内容阅读
目的：脓毒症(Sepsis)是感染导致的全身炎症反应综合征,病情发展快、预后差、病死率高,是临床面对的重要问题和研究热点。我们通过生物信息学技术分析发现：FOXO1和ACVR2A可能是在脓毒症患者生存组和死亡组差异表达的miRNA-223、miRNA-15a和niRNA-16的靶基因。本课题选择THP-1细胞系验证上述推论,为后续信号通路研究奠定基础。方法：(1)用LPS诱导THP-1细胞后,采用qRT-PCR检测各时间点(Oh、12h、 24h、48h、72h)三种miRNAs和(Oh、24h、48h、72h)两种靶基因mRNAs表达水平变化情况；(2)将miRNAs模拟物、抑制物转染THP-1细胞48h后,采用qRT-PCR检测各转染组相应miRNAs含量变化情况；(3)采用qRT-PCR和Western Blot分别检测miRNAs模拟物、抑制物转染THP-1细胞48h后FOXO1和ACVR2A的：mRNAs和蛋白表达变化情况。结果：(1)LPS诱导THP-1细胞后,miRNA-223/15a/16表达量均逐渐减少,在24h-48h达到最低点,72h时恢复至接近Oh水平,三种miRNAs在12h、24h、48h的表达量与各自Oh的表达量的差异均有统计学意义(P<0.01),miRNA-223在72h的表达量高于其Oh的表达量且差异有统计学意义(P<0.05),miRNA-15a和miRNA-16在72h的表达量与各自Oh的表达量相比差异无统计学意义(P>0.05)；靶基因FOXO1和ACVR2A的mRNAs表达量则逐渐升高,在48h达到最高点后逐渐减少,两种目的基因nRNAs目对含量在24h、48h、72h的相对表达量均高于各自Oh的表达量,差异均有统计学意义(P<0.01)。(2)THP-1细胞按分组分别转染miRNA-223/15a/16模拟物后,M-223/15a/16组与模拟物对照组相比相应的miRNA含量均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01);M-223/15a/16组FOXO1的mRNA水平和编码蛋白表达量均明显低于模拟物对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)：M-223/15a/16组ACVR2A的mRNA水平均低于模拟物对照组且差异有统计学意义(P<0.01),而ACVR2A编码蛋白表达量与模拟物对照组比较均无明显差异(P>0.05)。(3)按分组分别转染miRNA-223/15a/16抑制物后,I-223/15a/16组与抑制物对照组相比相应的miRNA含量均明显减少,差异均有统计学意义(P<0.01)；I-223/15a/16组FOXO1的mRNA水平和编码蛋白表达量均明显高于抑制物对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)；I-223/15a/16组ACVR2A的mRNA水平均高于抑制物对照组且差异有统计学意义(P<0.01),而ACVR2A编码蛋白表达量与抑制物对照组比较均无明显差异(P>0.05)。结论：在THP-1细胞系中,miRNA-223、miRNA-15a和miRNA-16能够调控FOXO1基因的表达。