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PRRSV流行范围广,变异性强,国内主要流行的毒株分为两类,一类以CH-1a、VR-2332为代表经典型和以JXA1、CHSX1401为代表变异株。研究人员为了解PRRSV变异情况,依据ORF5或者NSP2基因序列建立NSP2或ORF5单重PCR方法。NSP2/ORF5单重PCR灵敏性高,但是每次只分析一个基因的序列变异情况,数据稍显单薄。本试验建立PRRSV的NSP2-ORF5双重PCR方法,一次扩增ORF5、NSP2两个基因,可以同时分析两个基因序列变异情况。参考蓝耳高致病性变异株和经典株基因序列和相关引物序列,建立了一套NSP2-ORF5双重PCR方法并初步进行临床应用。经CH-1a、JXA1-R、JEV、PEDV、TGEV、PRV、CSFV NSP2-ORF5双重PCR方法特异性结果检验,该方法特异性检验特异性良好,PRRSV cDNA检测最低浓度5.95×10-3μg/μL。用该方法检测临床样品蓝耳阳性样品（检测引物鉴定）,共鉴定8株PRRSV的ORF5序列和7株PRRSV的NSP2序列,毒株基因序列与高致病性蓝耳病毒亚群（subcluster?）遗传距离最近,基因同源性最高。本试验建立的NSP2-ORF5双重PCR方法,特异性好、灵敏性高。应用该方法能对临床样品进行NSP2和ORF5两个基因序列变异情况分析,能对PRRSV毒株变异情况进行有效的分析。目前防控PRRSV感染主要通过疫苗免疫、药物保健和生物安全等措施进行综合防控。PRRSV疫苗主要有VR-2332、CH-1a经典株和JXA1、TJM-F92等变异株疫苗,在防控PRRSV感染方面,不同毒株的PRRSV活疫苗安全性问题（免疫抑制、基因重组、排毒继发感染等）存在较大差异。本试验拟用PRRSV疫苗（经典株和变异株）体外感染PAM,用qRT-PCR检测PAM免疫相关因子mRNA表达量的变化,了解经典株PRRSV疫苗和变异株PRRSV疫苗对PAM免疫功能相关因子mRNA表达的差异。选购健康猪肺（PCR检测PRRSV、PCV2、Mhp为阴性）,用灌洗法分离纯化PAM。将PAM分为三组:空白组对照组、JXA1R-PRRSV疫苗感染组、VR2332-PRRSV疫苗感染组,每组三个重复。37℃5%CO2分别培养0 h、12 h和24h取PAM,用qRT-PCR检测免疫相关分子和细胞因子mRNA表达量效果。结果显示,PRRSV感染PAM 12 h,在VR-2332组和JXA1-R组中,IL-1α、IL-1β、IL-6、TNFα、和MHCⅡmRNA表达量相比空白组均上调,其中VR-2332组TNFα、IL-6、IL-1α和IL-1β和MHCⅡmRNA表达量高于JXA1-R组,但VR-2332组中IL-10的mRNA表达量低于JXA1-R组。PRRSV感染PAM 24 h,VR-2332组和JXA1-R组IL-1α、IL-1βmRNA表达量相比空白组仍在升高,VR-2332组TNFα、IL-10、TLR2 mRNA表达量高于JXA1-R组,但VR-2332组中IL-1α、IL-1β的mRNA表达量低于JXA1-R组。PAM体外感染PRRSV疫苗毒株试验,经典株VR2332疫苗和高致病性蓝耳JXA-1株疫苗对PAM促炎细胞因子、免疫抑制性细胞因子的mRNA转录影响有差异,高致病性蓝耳JXA-1株疫苗感染PAM,免疫相关细胞因子mRNA表达量低于经典型VR-2332株疫苗。提示经典株PRRSV对PAMs的免疫抑制高于JXA1-R。建立NSP2-ORF5双重PCR方法,对PRRSV毒株变异情况进行有效分析,为PRRSV的防控提供参考。PRRSV疫苗（经典株和变异株）体外感染PAM试验,检测PAM感染两种疫苗毒之后相关因子表达水平,了解经典株PRRSV疫苗和变异株PRRSV疫苗对PAM相关免疫功因子mRNA表达差异,为评估疫苗安全性提供参考。