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目的用干扰RNA抑制CyclinE的表达,对CyclinE表达受抑制后产生的一些效应进行观察分析,并用双向凝胶电泳和质谱技术分析鉴定转染前后细胞内蛋白质组的表达差异,探讨CyclinE在肝癌细胞增殖中的作用,为肝癌发病机理的研究以及早期诊断、治疗提供参考依据。方法1.构建质粒表达载体pU6-cyclinE-shRNA,稳定转染肝癌HepG2细胞株,获得HepG2-cyclinEshRNA细胞系,检测其cyclinE基因表达情况及细胞生长曲线、细胞周期的改变。2.裂解HepG2-cyclinEshRNA细胞和G1期肝癌HepG2细胞,抽提细胞全蛋白,分别进行3次双向电泳进行分离,以其中2-DE效果好、点数多的一块胶作为参考胶,进行2组间的匹配分析,筛选出两组间差异6倍及以上且出现频率大于等于50%的蛋白点,并应用MALDI-TOF-MS和数据库搜索鉴定差异显著的蛋白点。结果1.HepG2-cyclinEshRNA细胞与转染空质粒HepG2细胞和未转染的HepG2细胞相比,生长速度减慢,GOG1期细胞增多,G2/M和S期细胞减少。3.相同条件下双向电泳后,G1期肝癌HepG2细胞株平均检测到435±51(n=3)个蛋白点,HepG2-cyclinEshRNA细胞376±44(n=3)个,Proxpress2D软件分析得到差异蛋白点15个。应用质谱鉴定出角蛋白19、波形蛋白、神经多肽h3等8个蛋白点。结论1.cyclinE干扰RNA可明显降低肝癌HepG2细胞cyclinE基因的表达。2.cyclinE干扰RNA抑制肝癌HepG2细胞增殖,影响细胞周期。3.在HepG2-cyclinEshRNA细胞中表达显著降低的蛋白质主要参与肿瘤增殖、代谢和氧化应激,其中2个完全差异表达的蛋白质参与肿瘤侵袭转移。