论文部分内容阅读
猪脂肪组织的沉积具有明显的组织特异性和时序性。肌内脂肪的含量是决定肌肉风味、嫩度和多汁性等肉质性状的重要指标。肌内脂肪细胞的分化聚脂受到骨骼肌所分泌各种细胞因子的影响。为探讨骨骼肌细胞对肌内脂肪细胞分化聚脂的旁分泌作用，本试验选择5—7日龄长白仔猪，采用胶原酶消化和差速贴壁法，从皮下脂肪组织和背最长肌肉组织分离得到皮下脂肪前体细胞和肌内脂肪前体细胞。脂肪前体细胞经Pref—1染色鉴定，阳性率达90％以上，诱导后可分化为成熟的脂肪细胞。同时从背最长肌肌肉组织分离骨骼肌卫星细胞，培养诱导至形成典型的肌管结构，用含2％FBS的DMEM/F12继续培养2h后收集培养液，即为条件培养液(CM)。用含CM的诱导培养液分别诱导肌内脂肪前体细胞和皮下脂肪细胞各4天，收集细胞，测定细胞内甘油三酯含量和总蛋白量含量，同时采用荧光定量PCR检测细胞分化过程中转录调控因子(PPARy、SREBP—1a)、脂肪合成相关酶(ACC、SCD—1)、脂肪酸转运和氧化相关基因(FAT/CD36、aP2)、信号分子相关受体基因(ACVR2B、adipo1R、adipo2R、IGF—IR) mRNA的表达，用Western Blot检测脂肪酸转运载体FAT/CD36的蛋白表达水平。结果表明，(1)诱导分化后第4天，肌内脂肪细胞CM处理组甘油三酯含量显著高于对照组，而皮下脂肪细胞处理组和对照组相比差异不显著。(2) CM处理皮下脂肪细胞96h后，PPARγ的表达量显著高于对照组，但肌内脂肪细胞CM处理组和对照组之间差异不显著。(3) CM还能显著抑制肌内脂肪细胞FAT/CD36、aP2基因mRNA的表达，Western Blot也证明CM能够抑制肌内脂肪细胞FAT/CD36的表达。(4)CM有上调肌内脂肪细胞和皮下脂肪细胞中与脂肪合成相关基因(SCD—1、ACC)，以及信号分子相关受体基因(ACVR2B、adipo1R、adipo2R、IGF—IR) mRNA的表达的趋势，但差异不显著。上述研究结果显示，骨骼肌细胞的旁分泌对肌内脂肪细胞和皮下脂肪细胞分化聚脂的作用存在明显差异。CM通过调控聚脂相关基因的表达，一方面降低肌内脂肪细胞甘油三酯氧化，另一方面提高脂肪细胞脂肪酸合成，从而提高肌内脂肪细胞和皮下脂肪细胞甘油三酯沉积水平。