目的：和背景　　 糖尿病周围血管病变(Peripheral vascular disease,PVD)是糖尿病发展到中晚期常见的严重并发症之一。随着人们生活方式的改变,糖尿病发病率越来越高,PVD也越来越受到医学界的关注。糖尿病周围血管病变主要累及肢体中小动脉,病变广泛,呈阶段性进展,最终造成严重的动脉血管狭窄、肢体缺血坏死。这种疾病截肢(趾)率高,是糖尿病患者致残的主要因为。PVD动脉远端血管闭塞或狭窄,血液循环差,常规临床药物治疗效果往往不明显；又鉴于PVD属多节段血管病变,无法进行介入腔内治疗或者血管搭桥手术。　　 正常情况下,机体存在血管自我修复机制。血管阻塞后,骨髓中的与血管新生相关的干细胞,如内皮祖细胞、血管周相比祖细胞、间充质干细胞等,通过血液循环迁徙至病变部位,增殖分化为成熟细胞,并最终通过血管发芽的方式建立侧枝循环。然而,由于PVD患者血管病变广泛,常累及局部多条血管,细胞不能通过循环抵达病变部位,难以完成自我修复过程。因此,利用已经病变的小血管为基础,通过细胞移植和基因治疗等手段,重新激活或纠正机体固有的血管再生能力,从而促进侧枝循环的形成,达到治疗PVD的新治疗策略。　　 对象、材料与方法:　　 本课题选择30例病人,以自身为对照,系统地观察了自体骨髓细胞治疗糖尿病PVD的安全性和有效性,建立了一整套独特的细胞采集、分离、检定、临床应用和疗效观察程序,为该技术的推广应用,提供了必要的临床资料。　　 选取双侧肢体均患有不同程度病变的糖尿病周围血管病变患者,并控制患者空腹血糖≤7.0mmol/L,餐后两小时血糖≤10.0mmol/L,取得所有患者及家属的同意并签署手术治疗同意书。　　 1.选取入选患者的左侧肢体作为实验组,右侧为对照组。共30例患者,60例肢体。在治疗室密闭条件下,室内空气负离子照射消毒60分钟,采集患者双侧髂骨骨髓100～200ml,淋巴细胞分离液分离出单个核细胞,配制成干细胞混悬液40～50ml,治疗前高倍显微镜行有核细胞总数计数,流式细胞仪进行CD34+细胞数计数。治疗前30分钟口服盐酸美施康定缓释片10mg镇痛,严格无菌操作,在患肢沿动脉走向多点肌肉内注射干细胞混悬液,按2cm×2cm间距进行缺血肢体肌肉注射,每点0.5～0.7 ml,进针深度:1.5～2cm,通常单侧肢体注射50～60针。　　 2.入选患者另一侧肢体作为对照组,进行对照。随访观察时间15个月,期间对双侧肢体主要临床症状和体征的变化进行监测:未接受治疗的肤色、肢体疼痛、冷感、溃疡、皮温改变及间歇性跛行；实验室检查指标变化的监察:数字减影动脉血管造影(digital subtraction arteriography,DSA)显示下肢血管的狭窄和闭塞程度、肱踝指数(ankle brachial pressure index,ABI)、神经电生理检查、神经电生理检查运动神经传导速度(MNCV)、感觉神经传导速度(SNCV)等,进行治疗前后的对照和评估。　　 3.统计学处理:采用SPSS10.0软件进行分析,治疗组干细胞治疗前后,对照组一般治疗前后采用配对资料t检验,治疗组和对照组之间数据比较两独立样本t检验,以α=0.05作为检验水准。　　 结果：　　 1.1治疗前两组自体结果比较　　 治疗组与对照组患肢冷感、肢体疼痛、间歇性跛行、皮温相比、差异无显著性(P>0.05)。　　 1.2治疗组治疗前后自体结果比较　　 治疗后治疗组肢体冷感明显减轻；疼痛评分明显低于治疗前；治疗后间歇性跛行评分比较治疗前明显降低；无痛性行走的距离明显延长,按照正常速度(50～80m/min)步行,平均单次行走距离比治疗前延长500-2000米不等；治疗组治疗后神经传导速度为MNCV,SNCV较治疗前明显加快(见表3),差异均有统计学意义(P<0.05)。　　 1.3对照组治疗前后自体结果比较　　 治疗后对照组肢体冷感无明显减轻,疼痛评分亦无明显变化,间歇性跛行评分比治疗前无明显降低,差异无统计学意义(P>0.05)。　　 1.4治疗后两组结果比较　　 治疗后治疗组肢体冷感明显减轻,疼痛评分明显低于治疗组,间歇性跛行评分比较对照组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。　　 1.4.1皮肤颜色和毛发:骨髓干细胞治疗前皮肤颜色暗红、青紫或苍白,治疗组骨髓干细胞治疗后皮肤颜色逐渐变得较前光泽、红润(见图2),治疗组自体骨髓干细胞治疗后下肢水肿也较治疗前显著改善(见图3)；原来下肢或足趾毛发脱落的地方有新生毛发并且毛发生长较前浓密；对照组无上述体征改变。　　 1.4.2溃疡:治疗组骨髓干细胞治疗后新鲜肉芽组织生长在溃疡底部逐渐有所生长,症状逐渐减轻。对照组症状无显著减轻(见图4、5)。　　 1.4.3皮温:治疗组在骨髓干细胞治疗后2天内皮肤温度逐渐开始升高,并随着时间推移,治疗组皮肤温度恒定在一个相对范围。治疗组骨髓干细胞治疗治疗后皮肤温度较治疗前明显升高,其差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组中皮肤温度则无明显变化。　　 2.实验室检查指标　　 2.1数字减影动脉血管造影:3个月后行下肢数字减影血管造影,发现治疗组可见丰富的侧支血管形成(见图6),与治疗前相比效果显著。对照组下肢血管造影则无明显变化。根据对结果进行评定,治疗组骨髓干细胞治疗前后DSA检查结果有显著变化,差异具有统计学意义(P<0.05)；而对照组并无显著改变；差异无统计学意义(P>0.05)；两组之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。　　 2.2踝肱指数(ABI),:治疗组骨髓干细胞治疗后ABI为(0.56±0.10),骨髓干细胞治疗前为ABI(0.35±0.20),两组结果比较差别具有统计学意义(P<0.05)。对照组ABI无显著改变(P>0.05)。治疗组骨髓干细胞治疗前后ABI增加为(0.16±0.12),对照组骨髓干细胞治疗后ABI增加(0.00±0.02),其差异有统计学意义(P<0.05)。　　 3.相关并发症和不良反应　　 3.1治疗前半小时应用美施康定缓释片10mg口服,在整个治疗过程中患者未诉疼痛,骨髓干细胞治疗过程中无其它不适症状。　　 3.2治疗组肢体在骨髓干细胞治疗24小时后查体可见下肢轻度肿胀,病人诉下肢有胀感,4～8天后,肢体肿胀消失。　　 3.3整个治疗过程中未出现其它异常症状及体征,相关辅助检查肝功能及肾功能无特殊改变,心电图无异常,凝血酶原时间及血细胞分析正常。　　 结论：　　 1.利用骨髓干细胞治疗糖尿病周围血管病变,安全有效,是一种切实可行的治疗方法。本研究为该疗法的广泛推广,提供了必要的临床观察资料。　　 2.治疗前口服美施康定缓释片10mg,完全可以达到镇痛和缓解疼痛的效果,经济适用,病人易接受,适宜推广。