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目的:以卵巢氧化应激为模型,研究中药补肾调冲方对小鼠卵母细胞质量的防治作用以及小鼠卵母细胞抗氧化通路。方法:选取75只SPF级4~5周龄ICR雌鼠,随机分成对照组、模型组和中药组共3组,每组25只。对照组连续灌胃20mg/kg/d生理盐水4周,在灌胃的最后一周开始每日腹腔注射无菌生理盐水,持续注射1周;模型组连续灌胃20mg/kg/d生理盐水4周,在灌胃的最后一周开始每日腹腔注射12.5mg/kg 3-硝基丙酸(3-NPA),连续注射1周;中药组连续灌胃20mg/kg/d补肾调冲方4周,在灌胃的最后一周开始每日腹腔注射12.5mg/kg 3-NPA,连续注射1周。在连续灌胃的第26天开始腹腔注射孕马血清(PMSG)0.2ml,48h后再腹腔注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)0.2ml。在注射hCG后14~16h收集卵母细胞和卵巢。称量小鼠体重和卵巢重量,计算小鼠增重及卵巢指数;观察所获卵母细胞是否排出第一极体,计算获卵数和卵母细胞第一极体排出率;检测卵巢组织SOD、GSH-Px、CAT的活性;利用DCFH-DA检测MⅡ期卵母细胞ROS水平;利用线粒体荧光探针(Mito-Tracker Green)观察MⅡ期卵母细胞线粒体分布;利用FITC-PNA对MⅡ期卵母细胞皮质颗粒进行荧光染色并观察其分布;提取MⅡ期卵母细胞RNA并利用RT-PCR的方法检测Sirt1、FOXO3a和Mn-SOD的表达水平。结果:1.小鼠增重和卵巢指数:三组小鼠增重没有统计学差异(P>0.05)。与对照组和中药组相比,模型组卵巢指数显著下降(P<0.05)。此外,中药组卵巢指数与对照组相比差异没有统计学意义(P>0.05)。2.小鼠卵母细胞数目和第一极体排出率:与对照组和中药组相比,模型组小鼠获卵数明显下降(P<0.05),但中药组与对照组之间获卵数没有明显差异(P>0.05)。与对照组相比,模型组和中药组小鼠卵母细胞第一极体排出率明显下降差异有统计学意义(P<0.05)。此外,模型组小鼠卵母细胞第一极体排出率相对于中药组显著下降(P<0.05)。3.MⅡ期卵母细胞ROS水平:与对照组和中药组相比,模型组卵母细胞ROS水平明显升高(P<0.05)。但对照组和中药组卵母细胞ROS水平无显著差异(P>0.05)。4.小鼠卵巢组织T-SOD、GSH-Px、CAT的活性:与对照组和中药组相比,模型组小鼠卵巢组织T-SOD、GSH-Px、CAT的水平均显著升高(P<0.05)。而与对照组相比,中药组小鼠卵巢组织T-SOD水平也显著升高(P<0.05),且GSH-Px、CAT水平没有明显升高(P>0.05)。5.MⅡ期卵母细胞线粒体的分布:与对照组和中药组相比,模型组卵母细胞线粒体呈聚集状分布所占比例较多,差异有统计学意义(P<0.05)。而对照组和中药组之间线粒体分布没有明显差异(P>0.05)。6.MⅡ期卵母细胞皮质颗粒分布:与对照组和中药组相比,模型组卵母细胞皮质颗粒以Ⅲ级形式分布所占比例较多,差异有统计学意义(P<0.05)。而对照组和中药组两组皮质颗粒的分布没有明显差异(P>0.05)。7.MⅡ期卵母细胞Sirt1、FOXO3a和Mn-SOD表达水平:与对照组相比,模型组和中药组卵母细胞Sirt1mRNA、FOXO3a mRNA和Mn-SOD mRNA表达均显著增加(P<0.05)。与模型组相比,中药组卵母细胞Sirt1 mRNA和FOXO3a mRNA表达均明显下降(P<0.05),而Mn-SOD mRNA表达没有统计学差异(P>0.05)。结论:3-NPA所诱导的小鼠卵巢氧化应激模型可导致卵巢储备功能下降,表现为促排卵后获卵数减少以及卵母细胞核成熟和质成熟障碍。而预先补充补肾调冲方可保护卵巢减少氧化损伤,改善卵母细胞质量。此外,小鼠卵母细胞内Sirt1可能通过FOXO3a的去乙酰化刺激Mn-SOD表达,从而减少ROS。