【摘 要】
：
早期妊娠失败是导致家畜繁殖率低下、阻碍畜牧业发展的重要原因之一。胚胎的成功附植需要发育良好的胚胎与具有良好容受性的子宫内膜之间建立复杂的紧密联系,子宫内膜异常是造成妊娠失败的主要原因。在山羊胚胎附植过程中,子宫内膜主要在E2、P4和IFN-τ等激素的作用下发生形态和功能上的改变,从而为孕体的附植提供最佳环境。尽管有众多细胞因子、转录因子参与调控胚胎附植过程中子宫内膜的功能,但由于其复杂的调控网络,
【基金项目】
：
国家自然科学基金（编号:31772817）；
论文部分内容阅读
早期妊娠失败是导致家畜繁殖率低下、阻碍畜牧业发展的重要原因之一。胚胎的成功附植需要发育良好的胚胎与具有良好容受性的子宫内膜之间建立复杂的紧密联系,子宫内膜异常是造成妊娠失败的主要原因。在山羊胚胎附植过程中,子宫内膜主要在E2、P4和IFN-τ等激素的作用下发生形态和功能上的改变,从而为孕体的附植提供最佳环境。尽管有众多细胞因子、转录因子参与调控胚胎附植过程中子宫内膜的功能,但由于其复杂的调控网络,对具体调控机制仍不是很清楚。YPEL3是一种在物种间高度保守的基因,目前认为YPEL3是一种肿瘤抑制因子。通过对山羊胚胎附植不同时期的子宫内膜进行转录组测序,发现在胚胎黏附期,YPEL3的表达受到显著抑制,推测YPEL3可能参与黏附期子宫内膜功能的调控,但是具体的作用以及调控机制目前尚不清楚。本研究通过免疫组化检测分析了YPEL3在山羊妊娠早期子宫内膜中的表达规律,进一步用E2、P4和IFN-τ联合处理山羊子宫内膜上皮细胞模拟黏附期子宫内激素环境,构建容受性模型,通过Western blot、RT-q PCR、细胞免疫荧光、慢病毒干扰、过表达载体转染、CCK-8以及ELISA等方法研究YPEL3在子宫内膜容受性建立过程中的作用。获得以下结果:（1）免疫组化结果表明YPEL3主要定位在山羊子宫内膜的腔上皮和腺上皮细胞,在基质细胞中少量表达。在山羊妊娠第18天即胚胎黏附期,YPEL3呈现出低水平表达。E2、P4和IFN-τ联合处理山羊子宫内膜上皮细胞,在m RNA以及蛋白水平上,YPEL3的表达均受到了抑制（p＜0.01）。（2）E2、P4和IFN-τ联合作用下,山羊子宫内膜上皮细胞过表达YPEL3能够抑制Vimentin的表达（p＜0.01）,对N-cadherin的表达无显著影响（p＞0.05）;同时抑制ISG15的表达（p＜0.01）,对RSAD2和CXCL10的表达无显著影响（p＞0.05）。无激素刺激下,干扰YPEL3能够促进Vimentin的表达（p＜0.01）,对N-cadherin的表达无显著影响（p＞0.05）,对细胞增殖也无明显影响,同时抑制PGFS、PTGES的表达和PGF2α的分泌（p＜0.01,p＜0.001）。（3）E2、P4和IFN-τ联合作用下,过表达YPEL3能够抑制Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin的表达（p＜0.01）,同时抑制β-catenin的核易位;无激素刺激下,干扰YPEL3能够促进β-catenin的表达（p＜0.01）和β-catenin的核易位。β-catenin激活剂CHIR99021预处理过表达YPEL3的山羊子宫内膜上皮细胞,能够恢复由于过表达YPEL3而导致的Vimentin表达水平的下降（p＜0.05）。综上所述,本研究发现YPEL3作为一种激素调节因子,在山羊胚胎附植黏附期通过调控Wnt/β-catenin信号通路参与调节子宫内膜的容受性,为揭示反刍家畜胚胎附植的机制、提高家畜胚胎受孕率提供新的思路。
其他文献
哺乳动物细胞主要利用转铁蛋白受体（Transferrin Receptor 1,TfR1）从血清中摄取与转铁蛋白（Transferrin,Tf）结合的铁。TfR1表达量下降或者定位异常都会造成细胞摄取铁的能力下降,导致细胞缺铁。另一方面,铁会催化产生活性氧（Reactive oxygen species,ROSs）,损伤生物大分子。为了获得充足的铁,同时避免铁量过多带来的毒性,细胞已进化出多种机制
动物分娩后子宫的细菌污染和组织退化导致产后子宫炎性环境加剧,引起子宫内膜炎等子宫疾病的发生。大肠杆菌是从患子宫内膜炎反刍动物子宫中分离出的最普遍的病原体,脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）是大肠杆菌细胞壁的结构成分,可通过启动子宫内膜细胞的免疫反应引起子宫内膜炎症。动物的子宫内膜炎发病率高且病因复杂,目前还没有有效的防治方法,因此,探究动物子宫内膜炎的发病机理具有重要意义。多种
草鱼（Ctenopharyngodon idellus）是我国淡水鱼类中重要的养殖种类,2016年年产量超过500万吨。随着养殖条件的逐渐恶化,多种病原侵染草鱼,严重影响草鱼的养殖。对草鱼免疫特性的研究,可以为高效防控草鱼疾病提供依据。呼吸爆发（Respiratory Burst,RB）,也叫氧爆发,是不同类型细胞快速释放活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）的过程,在免
细胞外囊泡（Extracellular vesicles,EVs）是由细胞向外释放的纳米级脂质双层囊泡,广泛存在于细胞外生物液体中,通过携带包括核酸、蛋白质在内的多种生物活性物质参与细胞间信息交流和机体生理功能的调控。在哺乳动物的卵巢卵泡发育中,只有不到1%的卵泡能发育成熟达到排卵期,而其余的卵泡在发育的不同阶段都出现闭锁。颗粒细胞的凋亡是哺乳动物卵泡闭锁的关键因素,目前已有的研究发现卵泡液中EV
胚胎基因组激活（EGA）是哺乳动物的早期胚胎发育过程中非常重要的一环,在这个过程中,许多转录因子和表观遗传修饰的变化对胚胎基因组激活都发挥了至关重要的调控作用。为了挖掘一个在哺乳动物胚胎基因组激活过程中都会发挥关键作用的基因,本研究通过分析人、小鼠、山羊的早期胚胎转录组数据,发现Zfp296在这三个物种早期胚胎发育过程中的表达趋势相似:相比于卵母细胞时期,它的表达量在EGA时期都发生了显著上调。Z
在辅助生殖过程中,体外的高氧环境容易使卵母细胞受到氧化损伤。为了获得足够数量的可移植的胚胎,女性或雌性经济动物通常需要进行多次超数排卵,激素药物价格较高,而且大量激素药物容易诱发卵巢过度刺激综合征（OHSS）。双硫仑（Disulfiram,DSF）在临床上用于戒除酒瘾,价格低廉,近年来发现DSF在治疗癌症、炎症和肥胖中也发挥重要作用。在肿瘤细胞中,DSF通过提高活性氧水平,降低谷胱甘肽水平,促进肿
胰岛素是目前治疗糖尿病的主要药物,其给药方式主要为皮下注射。然而长期注射胰岛素会引起多种不良反应,极大降低了患者的顺应性。针对这一问题,学者们对胰岛素的非注射给药途径进行了大量研究,其中口服途径被认为是最理想的给药方式。Sufactin脂肽是芽孢杆菌的天然产物,在生物医药领域具有很好的应用前景,用于胰岛素的口服给药具有较好的降糖效果。在胃酸环境中Surfactin脂肽能与胰岛素结合形成共沉淀,保护
苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）是世界上应用最成功的活菌类生物杀虫剂,对多种农业害虫和线虫具有特异活性。研究发现,Bt作为一种病原菌,除了能够产生主效杀虫因子Cry蛋白毒杀昆虫和线虫外,其基因组上还存在着大量潜在的致病因子参与杀虫,这些致病因子或是通过破坏宿主肠道细胞加速Bt入侵,或是通过抑制宿主免疫防御体系增强Bt的萌发与定殖。研究发现,宿主可以通过天然免疫、
雄性生殖干细胞（male germ stem cell,mGSCs）,又称精原干细胞（spermatogonial stem cells,SSCs）,是一类存在于曲细精管基底膜上能够自我更新和分化的成体干细胞,并最终分化为精子。m GSCs是研究精子发生、减数分裂的调控和细胞的重编程非常理想的体外模型。X-box binding protein 1（XBP1）基因作为内质网应激通路IRE1α-XB
猪作为一种重要的经济动物,也是器官移植的理想供体,然而其多能干细胞仍未完全成功建系。诱导性多能干细胞（iPSCs）是通过成熟体细胞重编程获得的细胞类型,在生物学特性、分化潜能、基因表达等方面均与胚胎干细胞相似,同时其供体细胞广泛,在生物研究和临床使用上更有优势。然而目前已有的猪诱导性多能干细胞（piPSCs）面临巨大的问题:如其多能性需要依赖外源基因的表达、所建立的piPSCs细胞系对培养条件的变