人脐带血移植NOD/SCID小鼠的实验研究

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目的摸索脐血来源的造血干细胞植入NOD/SCID小鼠达到高水平人源化所需要的条件。探讨植入后人的基因能否在NOD/SCID小鼠中表达并长期稳定的存在。期待利用该条件建立某些基因缺陷疾病的动物模型。方法实验分为两个阶段进行。第一步,比较予400cGy单次照射和400cGy分割照射移植后小鼠的生存情况。选择最佳照射方式作为第二阶段实验的照射的依据。第二步,分选脐血(CB)单个核细胞(MNC)2×10~8/ml,加入rHuSCF 100 ng/ml,照射后8小时内通过尾静脉植入小鼠。移植后+7至+14天皮下注射rhG-CSF注射液0.1ml(0.1ug╱天)。监测小鼠外周血的白细胞的动态计数了解植入的情况。用流式细胞技术检测小鼠外周血中CD45~+抗原的动态表达,聚合酶链反应(PCR)了解人Cart-1基因的表达情况。结果生存分析表明400cGy分割照射比单次照射移植的存活率高。移植后4-6周小鼠的外周血白细胞缓慢恢复,6周时基本达到照射前的水平(median:1.40×10~9╱L)。移植后4-16周经流式细胞仪的监测小鼠外周血CD45~+抗原的表达情况,提示:4周始出现表达(7.5%-22%),8周达到高水平的表达(66%-82%),16周仍有较高的表达量(23.1%-60.3%)。10周时所有存活的小鼠经PCR均检测到人Cart-1基因的表达。结论400cGy分割照射为适合本研究的最佳照射方式,其有助于造血干细胞的植入,并减少照射对正常组织的损伤。2×10~8CB来源的单个核细胞可以长期植入NOD/SCID小鼠骨髓重建造血,并能达到较高的人源化水平。
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