立题依据资料表明，由于多种原因，在我国确有不少已肯定能预防的食源性寄生虫病，如肺吸虫病、华枝睾吸虫病、猪(牛)带绦虫病、囊虫病、裂头蚴病、旋毛虫病和弓形体病等，在我国部分地区的城乡感染严重。 目前，对于此类食源性寄生虫病的诊断技术主要包括病原学检查、免疫学检查和分子生物学检查三个方面。该类疾病难以获得病原学诊断依据，临床极易误诊，耽误病程，造成患者不必要的痛苦和经济负担；分子生物学的检查技术条件要求很高，目前尚仅限于实验室试用阶段；因此，免疫学诊断成为国内外广大学者关注的焦点，希望能够研究开发敏感性高、特异性强、重现性好、操作简易、反应快速、微量准确和经济实用的食源性寄生虫病诊断技术与方法。 斑点酶联免疫吸附试验(dot-enzyme-linkedimmunosorbentassay，Dot-ELISA)是近年新发展的一种ELISA技术，选用对蛋白质有很强吸附能力的硝酸纤维素薄膜作固相载体，底物经酶促反应后形成有色沉淀物使薄膜着色，然后目测或用光密度扫描仪定量分析，该法具有微量、快速、经济、方便等特点，可用于检测抗体或抗原，这项技术已广泛应用于临床免疫诊断，且能获得较好的敏感性高、特异性强的检测结果。 目的:鉴此，本课题旨在根据酶联免疫吸附试验的原理，建立SPCT-dot-ELISA，以期获得较理想的敏感性高、特异性强的寄生虫病检测结果，从而为临床寄生虫病免疫学诊断和现场应用提供实验依据。 方法: 1、SPCT-dot-ELISA的建立及灵敏性和特异性指标的检测制备日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)、肺吸虫成虫可溶性抗原(PwA)、囊虫抗原(CcA)、旋毛虫蚴虫可溶性抗原(TsA)；BCA法测定抗原含量；将四种可溶性抗原包被在同一硝酸纤维素膜；封闭液封闭；加入病原学阳性确诊35份及10份阴性待检血清置4℃冰箱过夜；0.05％PBST第一次洗涤；加辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌A蛋白(1：500)室温孵育2h；0.05％PBST第二次洗涤；加底物显色。 2、对比试剂盒平行ELISA试验 用深圳市绿瀚、深圳市博卡ELISA试剂检测35份病原学确证阳性患者血清及阴性血清。 3、800份临床样品试验 SPCT-dot-ELISA检测800份临床样品，同时比较二种国内主要生产ELISA试剂盒厂商ELISA试剂产品，进行平行试验，并统计分析。 结果: 1、SPCT-dot-ELISA灵敏性、特异性指标检测结果 所有质控点均呈蓝色，10份日本血吸虫病患者血清在SEA点均呈蓝色，10份肺吸虫病患者血清在PwA点均呈蓝色，10份囊虫病患者血清在CcA点均呈蓝色，5份旋毛虫病患者血清在TsA点均呈蓝色。10份阴性对照血清显示所有质控点均呈蓝色，日本血吸虫、肺吸虫、囊虫和旋毛虫各标记点无显色反应。 2、对比试剂盒平行ELISA试验结果 用深圳市绿瀚、博卡ELISA试剂进行病原学确证阳性患者血清10份日本血吸虫病、10份肺吸虫病、10份囊虫病、5份旋毛虫病的检测：除旋毛虫ELISA法1份绿瀚、博卡是阴性，占20％，其它均是阳性。10份阴性血清检测结果：绿瀚试剂旋毛虫2份弱阳性，占40％，其它均为阴性；博卡试剂血吸虫1份阳性，占10％，旋毛虫1份阳性，占20％，其它均为阴性。 3、800份临床检测样品检测结果 SPCT-dot-ELISA检测CcA7例阳性(4例符合)、TsA15例阳性(12例符合)，SEA、PwA为阴性。绿瀚800例中88例阳性，博卡462例阳性；其中肺吸虫中绿瀚16例阳性，博卡52例；囊虫中绿瀚3例阳性，博卡169例；旋毛虫绿瀚35例阳性，博卡111例阳性；肝吸虫和血吸虫相似，绿瀚检测阳性分别为20和21例，博卡检测阳性123例和71例。 结论:本实验较成功的建立了SPCT-dot-ELISA，该法具有如下特点： 1、检测范围广：能同时检测血吸虫病、肺吸虫病、囊虫病、旋毛虫病4种寄生虫病患者血清中的特异抗体。 2、阳性检出率高：经病原学确证的阳性血清采用该法阳性检出率为100％。 3、交叉反应率低：肺吸虫与其它三种寄生虫无交叉反应现象；血吸虫、囊虫、旋毛虫之间有不同程度的交叉反应现象，其交叉反应率为2％至22％。 4、无假阳性及假阴性结果。 5、操作难度：有血液或血清的情况下，任何人、任何时间、任何地点均可操作。 6、成本价格：按100,000人份规模计算，成本价格在0.5～1.5元/每人份之间。 7、试剂盒适用范围广：适用于各类血防站所、卫生室和医院的血吸虫病的诊断以及大规模普查和流行区的疫情监测。