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抑制素作为调节下丘脑-垂体-性腺轴系的一员,已有研究证明抑制素的表达形式和水平与卵泡发育募集、选择、优势化等生理活动有关。因此,通过研究抑制素A及其对家禽繁殖性能的调控作用具有重要的理论和实践意义。本试验以蛋鸡为对象,研究抑制素A的INHA、INHBA亚基在鸡生殖系统及不同时期卵泡中的表达差异;INHA基因多态性及遗传效应分析;外源添加的抑制素A蛋白对颗粒细胞发育的影响。探索抑制素A对卵泡选择与优势化、卵泡成熟过程所起的关键性的作用,以期阐明抑制素A对各激素的调控以及颗粒细胞增殖、凋亡作用机制。获得的主要结果如下:(1)荧光定量PCR分析INHA、INHBA的m RNA在鸡生殖系统不同组织中的表达水平,结果发现INHA、INHBA主要在卵巢的不同等级卵泡中表达,INHBA在输卵管中的表达量较低。卵泡发育从LWF到F1,INHA的表达量呈现先上升后下降的趋势,F5卵泡中的表达量显著高于其他卵泡(P<0.05)。在等级前卵泡中,SYF中的表达量显著高于LWF(P<0.05),在SWF卵泡中并未检测到。INHBA在F1中的表达量显著高于其他等级卵泡(P<0.05)。随后利用western blot分析INHA、INHBA蛋白在鸡不同时期卵泡中的表达水平,结果发现:INHA在卵泡中的蛋白表达水平与m RNA类似,INHA蛋白在F5和SYF中的表达量较高,在F5中的表达量显著高于其他等级卵泡(P<0.05)。INHBA蛋白的表达量在F1中最高(P<0.05)。表明INHA、INHBA的表达量可能与卵泡发育相关,推测抑制素A可能参与调节鸡卵泡的发育。(2)利用抑制素A重组蛋白处理鸡卵泡颗粒细胞,结果发现,抑制素A可以提高鸡卵泡颗粒细胞的活性,并且呈剂量依赖效应,添加100ng/m L和200ng/m L浓度蛋白的试验组与空白对照组相比,颗粒细胞数目显著增加(P<0.05),高浓度重组蛋白(200ng/m L)显著抑制鸡颗粒细胞Bax、Caspase-3基因的表达(P<0.05);对Bcl-2和PCNA基因的表达则有促进作用。提示抑制素A蛋白在体外能够促进鸡颗粒细胞的增殖。不同浓度/时间的抑制素A蛋白处理体外培养的鸡颗粒细胞,结果发现,高浓度抑制素A可促进雌二醇的分泌(P<0.05);(100、200 ng/m L)浓度抑制素A促进孕酮的分泌(P<0.05),10ng/m L处理颗粒细胞24h对孕酮分泌影响不明显。(3)利用实时荧光定量检测对孕酮合成关键基因STAR、3β-HSD表达的影响,结果发现,抑制素A浓度梯度蛋白使STAR和3β-HSD基因的表达升高。200ng/m L处理(24-48h)细胞STAR和3β-HSD基因的m RNA表达量显著增加(P<0.05)。说明抑制素A可以促进颗粒细胞分泌孕酮和雌二醇。对颗粒细胞FSH、LH激素受体基因FSHR和LHR表达的影响,结果表明,对照组(0ng/m L)随着培养时间的增加,颗粒细胞FSHR的m RNA表达量呈现先上升后下降再上升的趋势,而高浓度的抑制素A(200ng/m L)在各个时间点都抑制了FSHR的表达;抑制素A(200ng/m L)处理(48-72h)颗粒细胞可显著增加LHR的m RNA表达量(P<0.05)。推测外源抑制素A能够促进鸡卵泡颗粒细胞雌二醇、孕酮的合成;高浓度的抑制素A可以显著抑制FSHR的表达,增加LHR的表达量。(4)通过对INHA基因的SNPs进行筛选并与产蛋性状关联性分析。测序结果共发现了12个突变位点,其中SNP1、SNP2、SNP3属于同义突变;SNP5、SNP6、SNP7属于错义突变;单个位点与蛋鸡繁殖性状的关联性分析,结果发现:SNP2、SNP3、SNP4、SNP5、SNP12与300日龄产蛋量的遗传效应达到显著水平(P<0.05)。综上所述,抑制素A参与调节鸡卵泡的发育,INHA在卵泡募集过程中发挥着重要作用,而INHBA可能对卵泡成熟起着关键作用。此外,抑制素A对卵泡颗粒细胞增殖及雌二醇、孕酮的合成也有不同程度的调控作用。INHA基因可作为鸡产蛋性能选择的分子标记。