家蚕脂肪酶I(Bmlipase-1)作为在家蚕中已经证明表现出抗家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus,BmNPV)活性的蛋白质,但关于该蛋白具体如何发挥抗病毒功能的机制还没有研究报道。本研究对Bmlipase-1在病毒复制增殖过程中对病毒复制相关基因的影响做了初步的探讨,以期解析Bmlipase-1的抗病毒机制,得出如下研究结果:1、成功构建了重组病毒:经构建可以同时表达病毒多角体基因和家蚕脂肪酶I基因(实验组)、病毒多角体基因和绿色荧光蛋白基因(对照组)的重组载体,再由Bac-to-Bac杆状病毒表达系统制备重组杆状病毒。在对照组中利用显微镜观察到绿色荧光和病毒多角体;在实验组中除了观察到病毒多角体外,Western Blot验证了家蚕脂肪酶I基因的表达。2、Bmliapse-1对BmNPV病毒复制相关基因dbp的表达有影响:将构建的重组病毒扩大培养并测量病毒滴度后,将等量病毒感染家蚕BmN细胞并在感染后不同时间收集细胞,将收集到的细胞提取RNA反转录成cDNA后,通过实时定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测病毒基因组拷贝数的变化以及病毒复制相关基因的表达量变化。qRT-PCR结果表明:病毒基因组拷贝数变化在24h最显著,在除dbp外其他检测的病毒复制相关基因中,表达量变化趋势并没有显著差别,只有dbp的表达量在感染后48h变化最显著。Northern Blot验证结果和qRT-PCR检测的表达量变化相一致。3、Bmlipase-1与dbp启动子有相互作用:通过凝胶阻滞迁移实验证明了dbp启动子与Bmliapse-1能够相结合;Bmlipase-1蛋白与dbp启动子结合的位置为启动子序列中的10个碱基序列(CACTTCAATT),通过构建包含结合位点的启动子(dbp-75bp)和去除结合位点的启动子(dbpL-65bp)的重组病毒,并以绿色荧光蛋白为报告基因,观察到绿色荧光存在明显差异,Western Blot结果证明这两个启动子之间的活性差异显著。启动子转录因子分析得出:这10个碱基序列中,存在一个6碱基(TTCAAT)的基序,推测这段基序在dbp启动子发挥作用时起着特别关键的作用。综上所述,我们推测得出Bmlipase-1的抗病毒机制是Bmlipase-1与BmNPV病毒复制相关基因dbp启动子的结合,降低了dbp的表达量,从而抑制了BmNPV复制增殖,最终实现抗病毒的结果。本文为鳞翅目昆虫病毒防治方面提供了新的理论基础,为更深入探索家蚕基因对病毒的抑制机制提供新的思路。