目的:癌症是严重威胁人类生命健康的常见疾病,而寻找有效的治疗肿瘤的方法是人类亟待解决的问题。癌细胞的两个重要特征是它们具有无限增殖的能力以及它们的增殖不受控制。细胞衰老通常被定义为不可逆的增殖抑制,它可以导致肿瘤抑制、组织修复、年龄相关的病理学性状以及组织和机体的老化。细胞衰老可以有多种原因引起,比如端粒缩短、活化的致癌基因、氧化应激压力、化疗药物以及由持续的DNA损伤应答引起的生存压力。通常情况下,在癌变过程中癌细胞可以绕过某些细胞衰老的信号通路以避免衰老。但是,由于还存在其他众多调节衰老的信号通路,所以癌细胞也是有可能衰老的。这就为用诱导细胞衰老方法治疗癌症提供了可能。我们早期研究发现剪接因子RBM4可以通过调控凋亡、增殖和迁移从而抑制肿瘤的进展。具体来讲,过表达RBM4可以通过调控Bcl-x基因RNA的选择性剪接诱导细胞凋亡。同时,过表达RBM4也可以拮抗原癌基因SRSF1,进而抑制m TOR通路的激活。有趣的是,我们还发现敲降RBM4同样能够抑制细胞的增殖和迁移。本研究的目的就是,探索敲降RBM4抑制细胞的增殖和迁移的机制以及为治疗潜力提供理论依据。方法:1.用重组的慢病毒感染H1299,A549和Hela细胞,而后用嘌呤霉素筛选稳转细胞。利用Western blot对RBM4的敲降效率进行验证。2.通过平板克隆和CCK8实验检测敲降RBM4对细胞增殖和生存能力的影响。3.利用划痕实验和铺基质胶的Transwell实验分别检测H1299,A549和Hela细胞迁移和侵袭能力的变化。4.通过常用的衰老相关的β半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色实验检测敲降RBM4引起的H1299,A549,MRC-5和HFF-1细胞的衰老变化。5.Western blot也被用来检测细胞衰老相关蛋白的表达水平。6.流式细胞术被用来检测H1299和A549细胞敲降RBM4引起的细胞周期的变化。7.用免疫荧光的方法检测衰老相关的PML小体。8.为了能观察到细胞衰老的过程,使用了p LKO-Tet-On这一在加入Dox够诱导细胞敲降RBM4的系统。同样,通过Western blot检测敲降效率,通过SA-β-gal实验检测衰老细胞的百分比。结果:1.成功构建了敲降RBM4的H1299、A549和Hela的细胞,并且和对照组相比,在蛋白水平敲降了RBM4。2.通过平板克隆和CCK8实验检测到,敲降RBM4显著地降低了细胞的增殖和细胞活力。3.除此之外,划痕实验和铺基质胶的Transwell实验结果显示敲降RBM4也显著地降低了细胞的迁移和侵袭能力。4.SA-β-gal染色实验结果显示,敲降RBM4引起H1299,A549,MRC-5和HFF-1细胞的衰老。5.敲降RBM4后,细胞衰老相关的蛋白CDKs、p RB和Cyclin D1表达水平降低,而p21、p27的表达水平升高,这与典型的衰老通路是相一致的。6.流式细胞术结果显示,在H1299和A549细胞中敲降RBM4将细胞周期阻滞在了G0/G1期。7.免疫荧光结果显示,在敲降RBM4后细胞核中的PML小体数目也增多。8.衰老的回复实验结果显示,外源过表达RBM4能够部分逆转敲降RBM4诱导的细胞衰老。9.p LKO-Tet-On系统的结果显示,随着Dox加入时间的增长,RBM4的水平逐渐降低,且衰老细胞逐渐增多。结论:敲降RBM4通过诱导细胞衰老抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,这为肺癌的治疗提供了新的靶点。