论文部分内容阅读
枯草芽孢杆菌B68是从海南儋州市香蕉园中筛选获得的一株拮抗细菌。该菌株对香蕉冠腐病有较强的抑制效果,其无菌滤液还能抑制香蕉冠腐病病菌孢子的萌发,融解菌丝细胞壁,具有开发成抗真菌农业抗生素的广阔前景。鉴于该菌株是野生型菌株,一般发酵效价低,还不能满足工业化开发的要求。本文首先对该菌株的发酵条件进行了研究,然后又以该菌株为出发菌株,以香蕉冠腐病镰刀菌F4为指示菌株,采用物理和化学方法对该菌株进行了诱变育种,其结果如下:1.枯草芽孢杆菌B68的发酵条件:在所选的16种培养基中最适合枯草芽孢杆菌B68的是6号培养基(配方是葡萄糖40g,蛋白胨10g,酵母膏10g,蒸馏水1000mL),其培养滤液对香蕉冠腐病菌半裸镰刀菌F4菌丝的抑菌率为77.12%,孢子萌发率仅为0.33%。基本营养物质的初步筛选实验证明最适合的碳源是葡萄糖,其次是蔗糖、可溶性淀粉;最适合的氮源是酵母膏,其次是蛋白胨。培养基初始pH值、振荡培养时间、菌龄、温度等对抗菌物质的分泌有一定的影响。结果表明初始pH值7.0、菌龄为3d、28℃振荡培养48h,为菌株的最佳发酵条件。2.不同的物理和化学诱变剂处理B68菌株的结果表明,不同的诱变剂对该菌株有着不同的致死效应。通过诱变育种,利用平板对峙培养的初筛方法,共获得了28株高效突变株。3.通过对初筛得到的28株菌株进行摇瓶发酵实验,获得12株优良菌株。其中紫外线诱变获得3株,U-28、U-43和U-116,它们的抑菌效果比原始菌株B68提高了3.55%,4.37%,3.64%;硫酸二乙酯诱变也获得了3株突变株,D-24、D-26、D-87,它们的抑菌效果比原始菌株B68提高了4.22%,5.90%,3.83%。紫外线和硫酸二乙酯复合诱变最终获得2株突变株,UD- 7,UD-93,它们的抑菌效果比原始菌株B68提高了2.27%,2.86%。亚硝基胍诱变获得4株突变株,N-3,N-36,N-52,N-112,抑菌效果比原始菌株B68分别提高了5.69%,4.39%,5.32%,3.22%。4.把复筛后抑菌效果较好的菌株共12株进行传代实验,结果表明诱变株比原始菌株B68更能稳定地遗传。